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凝胶色谱（GPC）

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主题：【讨论】有没有人用过甲醇做GPC流动相？

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骑乌龟去流浪

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发表于：2013/10/16 08:41:48 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

有没有人用过甲醇做GPC流动相？所选的标准品是什么呢？我试了PEG（安捷伦标样红、黄、绿三瓶）和PMMA，但是PEG只成一个峰出来，而PMMA没有响应。进空白甲醇时，在RT0~2min有个包，所有样品在这个位置都有个包。谁能解个疑，十分感谢！检测器为示差折光，柱子是PLgel 5um MIXED-C.

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2013/10/16 10:38:37 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

甲醇做流动相，极性不行吧

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小不董

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2013/10/16 12:28:21 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

没用过直接甲醇作流动相的，极性很大，没见过用甲醇的，pl-aquagel水相的可以加到40-50%的甲醇。极性就用DMAC或者DMF不行吗？

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小不董

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2013/10/16 12:29:23 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

如果真要用甲醇，也要加盐的，可能需要的浓度还不能太小。

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小不董

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2013/10/16 15:49:26 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我查看了PL的GPC色谱柱，没有用甲醇的案例，可以选择上图中的良溶剂最为流动相。

另根据你样品的分子量范围参考右图中来选择柱子。

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histone1

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2013/10/16 16:16:50 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

什么样品一定要用MeOH来测GPC？

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骑乌龟去流浪

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2013/10/17 8:46:39 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 小不董(doxw0323) 发表:
没用过直接甲醇作流动相的，极性很大，没见过用甲醇的，pl-aquagel水相的可以加到40-50%的甲醇。极性就用DMAC或者DMF不行吗？

试过DMAc，出峰会提前，本应该是几万的样品，测出来几百万，而且PD很大，快到10了。就是我跟你说过的水相测不好的涂料样品，以前有将样品处理后制成能溶于THF的衍生物，测出来最多几千到几万，估计实际样品分子量应该不会差太多吧。你倒提醒了我，也许可以再用pl-aquagel的柱子，走水和甲醇的混合流动相。

再有一个问题，国庆后脱气机故障了，后来刚好新装2台HPLC，就把其中一台暂时用不上的HPLC上的泵模块（带seal wash）整个换到了GPC上，先用着。但是发现基线很不好，冲很久的柱子和流通池，基线的波动都在100mv，这以前从来没有出现过。而且昨天测PVDF的时候，用的都是同一种DMAc，前处理方法什么的都一样，计算方法也一样，但测出来的结果跟国庆节前（就是仪器没坏前）相差了好几万，样品本身也就10W到30W左右，是同一批样品，这样的差距有点让人接受不了了。会是什么原因呢，难道换个泵模块就会导致这么大的影响？或者我应该重做一次标准曲线？但是基线突然不好是什么原因呢？

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2013/10/17 8:47:40 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 histone1(histone1) 发表:
什么样品一定要用MeOH来测GPC？

因为出峰好

我也是在瞎用

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2013/10/17 8:48:44 8楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 小不董(doxw0323) 发表:
如果真要用甲醇，也要加盐的，可能需要的浓度还不能太小。

加盐的话一个个加哪种盐？我一看到盐就头痛了

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小不董

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2013/10/17 9:24:35 9楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 骑乌龟去流浪(v2781583) 发表:
原文由 小不董(doxw0323) 发表:
没用过直接甲醇作流动相的，极性很大，没见过用甲醇的，pl-aquagel水相的可以加到40-50%的甲醇。极性就用DMAC或者DMF不行吗？

试过DMAc，出峰会提前，本应该是几万的样品，测出来几百万，而且PD很大，快到10了。就是我跟你说过的水相测不好的涂料样品，以前有将样品处理后制成能溶于THF的衍生物，测出来最多几千到几万，估计实际样品分子量应该不会差太多吧。你倒提醒了我，也许可以再用pl-aquagel的柱子，走水和甲醇的混合流动相。

再有一个问题，国庆后脱气机故障了，后来刚好新装2台HPLC，就把其中一台暂时用不上的HPLC上的泵模块（带seal wash）整个换到了GPC上，先用着。但是发现基线很不好，冲很久的柱子和流通池，基线的波动都在100mv，这以前从来没有出现过。而且昨天测PVDF的时候，用的都是同一种DMAc，前处理方法什么的都一样，计算方法也一样，但测出来的结果跟国庆节前（就是仪器没坏前）相差了好几万，样品本身也就10W到30W左右，是同一批样品，这样的差距有点让人接受不了了。会是什么原因呢，难道换个泵模块就会导致这么大的影响？或者我应该重做一次标准曲线？但是基线突然不好是什么原因呢？

更换过了，就要重新做曲线。

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