药典中的检测方法也应优化
柴胡为伞形或狭叶科植物,按性状不同,分为“南柴胡”和“北柴胡”,药物成分主要集中在根部,称为柴胡皂苷,其中柴胡皂苷a、d含量较高,为主要成分。
柴胡的功效:主治感冒发烧、解热去火、镇静止痛、舒肝和胃、口苦耳聋、头痛目眩、月经不调,抗菌、抗肝损伤、抗病毒,降血脂、降胆固醇等等,药效良好,作用平稳可靠。
柴胡药效良好,功效多,它的用量很大。它的有效成分的可靠性应当符合要求,所以对其含量的成功检测是非常重要的。
现在药物检测都是以2010版药典为依据,下面就介绍下药典方法在具体实验中的应用。
实验部分
先看看药典中是怎么说的。
仪器
高效液相色谱仪(配紫外检测器、二元高压梯度洗脱装置)
电子天平,0.0001g
超声波清洗器
离心机,不低于4000r/min
恒温水浴
回流装置
溶剂过滤器装置
试剂
柴胡皂苷a、柴胡皂苷d标准品溶液
甲醇,色谱纯
乙腈,色谱纯
乙醇,分析纯
石油醚,分析纯
乙酸乙酯,分析纯
正丁醇,分析纯
氨水,分析纯
超纯水或二次蒸馏水
色谱条件
色谱柱: Venusil XBP C18(L) 色谱柱 (250mm×46mm,5μm)
流动相:A:B=乙腈:水
流速:1.0mL/min
波长210nm
进样量:20ul(手动进样阀进样)
柱温:室温
梯度表:
药典梯度表:
| |||||||||||||||||||||||||||||
序号 | 时间(min) | A(%) | B(%) | ||||||||||||||||||||||||||
1 | 0 | 25 | 75 | ||||||||||||||||||||||||||
2 | 30 | 64 | 36 | ||||||||||||||||||||||||||
3 | 31 | 90 | 10 | ||||||||||||||||||||||||||
4 | 37 | 90 | 10 | ||||||||||||||||||||||||||
5 | 38 | 25 | 75 | ||||||||||||||||||||||||||
6 | 45 | 25 | 75 |
修改梯度表后对照品色谱图:
这个谱图后面部分有些难看,不过取前30min就好看多了。
连续进样五次,谱图效果还是相当不错的,和药典中的梯度方法做出的不相上下,两种样品相差不大,定性重复性约0.5%,定量重复性约0.7%。
效果还不错,分析时间缩短了20分钟。这个我想大多实验室工作人员应该都会心动的吧。 按上述色谱条件对某柴胡供试品溶液测定,色谱图如下:
这个效果也很好,计算结果也没问题。该梯度洗脱方法完全可以使用。
注意事项:
1.由于各地、各季节的柴胡成分及含量都可能不同,所以针对不同地方或同一地方不同季节的柴胡,检测结果要想准确、可靠,前处理方法和检测条件(色谱条件)都应该做出相应的优化;
2.针对不同的仪器和样品,检测波长可选205-215nm之间的波长,尽量使被测物质具有较好的检测效果(峰形好,灵敏度高),干扰物尽量少(灵敏度低)的波长作为检测波长;
3.针对出峰时间剃度表可做适当的修改,在确保不影响分析效果的前提下,尽量缩短分析时间;
4.有时可以采样等度洗脱方式,如乙腈:水=45:55或50:50或55:45等等,但前提是一定得保证①两种柴胡皂苷主峰的峰形及分离度,②两主峰不受杂质干扰。
5.室温若变化大、不稳定,最好控制色谱柱温度,一般采用柱温箱控制,若柱温箱只有加热功能,温度可以比环境温度适当高一点;
6.有时为了缩短出峰时间及提高分离度(前提是不能影响分析效果),选择更合适的柱子或新柱子,调节温度,改变流速,改变流动相的配比及选择更合适的梯度洗脱方式等操作。
结论
本方法提取测柴胡皂苷a、d方便、简单、快捷,分离度好,分析时间短,结果稳定可靠,可以作为柴胡药材中柴胡皂苷a、d含量测定的方法。参考该方法中的注意事项对该方法进行优化,效果更佳。
原文由 wangshirf(wangshirf) 发表:是啊 是啊 但需要根据情况做一些优化调整原文由 xiaoxu(xufangdan) 发表:原文由 wangshirf(wangshirf) 发表:如此说来药典方法是没有毛病的呀
你只是改变了梯度洗脱程序,没有优化提取方法吧!,在讨论中,你写了提取方法的字眼!提取方法是药典现成的!
况且,你的色谱图 显示的是a b 应该是a /d!!!!!!!!!!!!这才是真正的乱套!!!!!!!!!!!!!!
此外,梯度可允许小范围改动,实际实验中 ,由于所用的柱子型号 不同,长短不同,出峰时间也不一样 可以微调!
如果有毛病的话,早就得改了!!!!!