主题：【求助】液相色谱（hplc）测样的保留时间问题

原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:
不正常，仪器如果做其他的正常，那你的样品PH值一样么

原文由 zhoujin83(zhoujin83) 发表:
可以检查一下仪器流速是否稳定，是否配置了柱温箱，如果这些都没问题，我想就是方法的问题了，因为甲醛具有一定的酸性，方法中造成RT不稳定的主要因素就是pH的问题，楼主不妨使用具有缓冲能力的流动相试试。

原文由 yuki0414(yuki0414) 发表:

原文由 zhoujin83(zhoujin83) 发表:
可以检查一下仪器流速是否稳定，是否配置了柱温箱，如果这些都没问题，我想就是方法的问题了，因为甲醛具有一定的酸性，方法中造成RT不稳定的主要因素就是pH的问题，楼主不妨使用具有缓冲能力的流动相试试。

流速设设置了1ml/min,但我不知道怎么看它流速是否稳定，请问怎么看？

柱温箱是有的。ph值没测过。样品使用乙腈作溶剂，流动相也是乙腈加水。方法也从未改变，

而且以前一直都这样做，没出现这种问题。

柱子用久了会不会有影响？你们是怎么检验柱子是否需要更换的？

原文由 zhoujin83(zhoujin83) 发表:

原文由 yuki0414(yuki0414) 发表:

原文由 zhoujin83(zhoujin83) 发表:
可以检查一下仪器流速是否稳定，是否配置了柱温箱，如果这些都没问题，我想就是方法的问题了，因为甲醛具有一定的酸性，方法中造成RT不稳定的主要因素就是pH的问题，楼主不妨使用具有缓冲能力的流动相试试。

流速设设置了1ml/min,但我不知道怎么看它流速是否稳定，请问怎么看？

柱温箱是有的。ph值没测过。样品使用乙腈作溶剂，流动相也是乙腈加水。方法也从未改变，

而且以前一直都这样做，没出现这种问题。

柱子用久了会不会有影响？你们是怎么检验柱子是否需要更换的？

1. 检查仪器流速准确性，可以使用纯水作为流动相，拆下色谱柱，用容量瓶接住流动相，持续一段时间，比如2min，然后取出容量瓶，放在天平上称量，通过容量瓶的质量差计算出液体质量，再通过密度计算出体积，进而就可以知道流速准确度。这样的检测一般需要重复检测几次。

2. 乙腈和水做流动相确实是没什么缓冲能力，但是我也不确定会不会导致甲醛保留不稳定。楼主可以配一份pH7.0的10mM的磷酸二氢钾溶液代替水，再分析一次俺看保留情况。

3. 一些进口品牌的色谱柱基本上不会影响保留，某些国产的不好说，但我使用过的月旭和博纳爱杰尔的还是没问题。关于色谱柱是否需要更换，一般是以柱效作为参考的。我们检测柱效的方式是，配制一份1mg/ml的甲苯溶液，用甲醇溶解，进样。分析前后的柱效变化，如果低于购买时的70%就会换新的。

也许还有其他原因，比如漏液、流动相混合器等，需要逐一查找，但是可以从简单的开始。其实要想知道仪器是否有问题，可以看看其他项目的保留时间是否稳定，如果是稳定的，基本就可以排除仪器问题，进而查找方法问题了。

原文由 wajer(anwiner) 发表:

原文由 zhoujin83(zhoujin83) 发表:

原文由 yuki0414(yuki0414) 发表:

原文由 zhoujin83(zhoujin83) 发表:
可以检查一下仪器流速是否稳定，是否配置了柱温箱，如果这些都没问题，我想就是方法的问题了，因为甲醛具有一定的酸性，方法中造成RT不稳定的主要因素就是pH的问题，楼主不妨使用具有缓冲能力的流动相试试。

流速设设置了1ml/min,但我不知道怎么看它流速是否稳定，请问怎么看？

柱温箱是有的。ph值没测过。样品使用乙腈作溶剂，流动相也是乙腈加水。方法也从未改变，

而且以前一直都这样做，没出现这种问题。

柱子用久了会不会有影响？你们是怎么检验柱子是否需要更换的？

1. 检查仪器流速准确性，可以使用纯水作为流动相，拆下色谱柱，用容量瓶接住流动相，持续一段时间，比如2min，然后取出容量瓶，放在天平上称量，通过容量瓶的质量差计算出液体质量，再通过密度计算出体积，进而就可以知道流速准确度。这样的检测一般需要重复检测几次。

2. 乙腈和水做流动相确实是没什么缓冲能力，但是我也不确定会不会导致甲醛保留不稳定。楼主可以配一份pH7.0的10mM的磷酸二氢钾溶液代替水，再分析一次俺看保留情况。

3. 一些进口品牌的色谱柱基本上不会影响保留，某些国产的不好说，但我使用过的月旭和博纳爱杰尔的还是没问题。关于色谱柱是否需要更换，一般是以柱效作为参考的。我们检测柱效的方式是，配制一份1mg/ml的甲苯溶液，用甲醇溶解，进样。分析前后的柱效变化，如果低于购买时的70%就会换新的。

也许还有其他原因，比如漏液、流动相混合器等，需要逐一查找，但是可以从简单的开始。其实要想知道仪器是否有问题，可以看看其他项目的保留时间是否稳定，如果是稳定的，基本就可以排除仪器问题，进而查找方法问题了。

学习了！然后怎么判断新买的色谱柱的柱效呢？是一开始先用1mg/ml的甲苯溶液，用甲醇溶解，进样，得到那时候的柱效，再跟现在比，是这样吗？所以新的柱子要先进1mg/ml的甲苯溶液