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主题：【分享】结晶紫酶联免疫反应测试盒

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reagen56
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发表于：2014/05/05 15:29:17 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
概述

REAGEN™ 结晶紫酶联免疫反应检测试剂盒是利用竞争性的酶联反应原理定量检测分析结晶紫在鱼、虾以及鱼池或者鱼缸水样中的含量。该试剂盒主要有以下特点：

Ø        高回收率（80-95%），快速地从鱼虾或者水样中提取结晶紫。

Ø        试剂盒也可以检测隐性结晶紫，检测前先用提供的氧化液将隐性结晶紫转变成有色结晶紫。

Ø        96孔高通量定量检测，鱼或者虾样品的检测下限为0.1ppb。

Ø        制备好的样品，可以直接用于LC或者LC/MS确认。

Ø        高重复性。

试剂盒原理

实验方法基于竞争性酶联反应原理。微孔板上包被有CV的特异性抗体。测试分析时，样品和CV-HRP耦合物共同孵育。如果样品中含有CV抗原，就会竞争抗体，从而阻止CV-HRP耦合物与抗体结合。加入HRP耦合物的底物(TMB)，在加入底物后将催化底物显色，根据颜色反应的灵敏度来确定样品中CV的浓度。颜色的深浅同样品中药物的浓度成反比关系。

检测步骤

以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

试剂每个反应需要的体积24 次反应的体积
CV—HRP耦合物50 mL1.2 mL
1倍工作洗液1 mL24 mL
终止液100 mL2.4 mL
底物100 mL2.4 mL


（1）        加入100mL的标准品或样品于所设定的孔中；

（2）        在每孔中加入50mL CV-HRP耦合物，轻敲微孔板边缘混匀1分钟；

（3）        避光室温（20-25℃）温育1小时；

（4）        洗板3次，每次加入250mL 1×洗液，最后一次尽量甩干并在吸水纸上吸干；

（5）        加入100mL的TMB底物；

（6）        在室温下避光培养20分钟，加入100mL的终止液终止反应，在450nm下读OD值 (底物本身是无色的，颜色发生变化不能使用。孵育时适当覆盖微孔板)。
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2014/5/23 8:10:55 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有些简单，最好补充完整
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