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主题：【求助】如何再生菲罗门c18柱？

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markyiqi
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发表于：2014/05/26 10:04:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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最近在走一个生物样品，处理出来的样品，用流动相溶解不好，有白色混悬物，进样后，柱子柱压很高，初步判断为柱前端堵了，用甲醇，异丙醇反冲，柱压没降，不知道怎么再生
推荐答案：袖剑回复于2014/05/27
你做的是生物样品，里面的蛋白或多肽可能会导致堵塞。清洗程序（将色谱柱按下面程序进行反冲）：如含有缓冲盐，先用20个柱体积的流动相冲洗将其除去；再按下面的梯度条件，运行两次：

A： 0.1%TFA的水溶液

B：0.1%TFA加入到乙腈/异丙醇（1:2）中

梯度条件：B相25%到100%，30min

最后用10倍柱体积的流动相平衡，不要将色谱柱保存在含有TFA的溶液中
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2014/5/26 10:07:21 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
拆开柱头清洗筛板
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支点
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2014/5/26 14:24:23 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可以使用超声清洗筛板，然后低流速长时间冲洗色谱柱，关键是看你的样品在什么条件下溶解度较好。
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三人行
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2014/5/26 22:25:18 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
清洗柱塞板，如果填料被污染还要更换入口端的少许填料，供试液进样前一定要过滤。
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袖剑
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2014/5/27 10:14:44 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 markyiqi(v2851394) 发表:
最近在走一个生物样品，处理出来的样品，用流动相溶解不好，有白色混悬物，进样后，柱子柱压很高，初步判断为柱前端堵了，用甲醇，异丙醇反冲，柱压没降，不知道怎么再生
你做的是生物样品，里面的蛋白或多肽可能会导致堵塞。清洗程序（将色谱柱按下面程序进行反冲）：如含有缓冲盐，先用20个柱体积的流动相冲洗将其除去；再按下面的梯度条件，运行两次：

A： 0.1%TFA的水溶液

B：0.1%TFA加入到乙腈/异丙醇（1:2）中

梯度条件：B相25%到100%，30min

最后用10倍柱体积的流动相平衡，不要将色谱柱保存在含有TFA的溶液中
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zzhyy980601
zzhyy980601
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2014/5/28 9:27:08 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
对于不了解的样品，要先做相容性试验，看是否能溶解在流动相里。现在这种情况应该用能溶解样品的溶剂（而且要对柱子兼容的）冲柱子，除去柱子中的样品，再按常规的方法冲。或者将柱子倒过来，低流速反冲。
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