主题：【求助】关于流动相缓冲液PH的选择

原文由 hgycook 发表:
1 .确定最佳分离状态时的流动相pH
2 .选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液（即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液）
3 .确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收（在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和 柠檬酸的缓冲液）

原文由 iamyounger 发表:

原文由 hgycook 发表:
1 .确定最佳分离状态时的流动相pH
2 .选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液（即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液）
3 .确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收（在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和 柠檬酸的缓冲液）

非常感谢您的帮忙，
1、就是难以确定最佳分离状态时的流动相ph，0.1mol/L的HAC是参照参考文献的
2、意思是选择与目标物PKa相近的PH缓冲液？
3、检测波长为280纳米，醋酸缓冲液在此波长下，不干扰检测

原文由 hgycook 发表:
如果PH定为4.5  选PKa为4.5的缓冲液

原文由 iamyounger 发表:
本人正在做3，4二羟基苯丙氨酸这个物质含量的测定，因其含有氨基和羧基，用甲醇：0.1mol/L的HAC（PH=2.86）做流动相，检测波长为280nm，其保留时间为2min（ODS C18柱），闲其保留时间比较短，担心杂质未完全分离。由于两性化合物PH影响很大，请教论坛高手，目标物3，4二羟基苯丙氨酸的流动相合适的缓冲液PH该如何定。附：网络上查得3，4二羟基苯丙氨酸pka值为 9.88, 2.36，8.68，11.68（其中2.36应该就是-COOH的pka值）

原文由 wenshaowei-2008 发表:

原文由 iamyounger 发表:
本人正在做3，4二羟基苯丙氨酸这个物质含量的测定，因其含有氨基和羧基，用甲醇：0.1mol/L的HAC（PH=2.86）做流动相，检测波长为280nm，其保留时间为2min（ODS C18柱），闲其保留时间比较短，担心杂质未完全分离。由于两性化合物PH影响很大，请教论坛高手，目标物3，4二羟基苯丙氨酸的流动相合适的缓冲液PH该如何定。附：网络上查得3，4二羟基苯丙氨酸pka值为 9.88, 2.36，8.68，11.68（其中2.36应该就是-COOH的pka值）

你的样品极性太大了
使用反相系统，怎么调，保留时间都不会变化多少
建议使用正相色谱试试