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液相色谱（LC）

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主题：【讨论】绝对回收率到底怎么计算才正确？

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sunway126

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发表于：2009/07/12 20:22:19 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

首先，提一个问题：取180ul空白血浆，加20ul药物A（50ug/ml），再加50ul内标（20ug/ml），涡旋，加提取溶剂乙醚（乙酸乙酯等）1ml，涡旋，离心后，取上清提取溶剂0.8ml，吹干，用100ul流动相复溶，离心后，取10ul进样。峰面积为AS1。问：药物A的绝对回收率，提取回收率，准确度，基质效应分别怎么计算？

常见的绝对回收率计算方法：

方法a：因为血药浓度近似为：50/(180+20)=5ug/ml，最后复溶量为100ul，就相当于200ul的血浆最后变成了100ul，故复溶液中的血药浓度应该为10ug/ml，接下来进样储备液中10ug/ml的标液得到峰面积AS2，用AS1*(1/0.8)/AS2*100%=绝对回收率（在液相色谱中，基质效应为0，而提取回收率等于绝对回收率）。

方法b：取200ul纯水，涡旋，加提取溶剂乙醚（乙酸乙酯等）1ml，涡旋，离心后，取上清提取溶剂0.8ml，吹干，加20ul药物A（50ug/ml）后，再加80ul流动相复溶，离心后，取10ul进样。峰面积为AS3，用AS1*(1/0.8)/AS3*100%=绝对回收率。

问题：a：上述两种方法哪种更合理？

b：方法a和b中所乘的系数（1/0.8）是否有科学依据？

c：方法a中血药浓度应该是（180+20）的血浆近似算法呢，还是（200+20）近似算法呢，或者是先将20ul药物A溶液吹干后再加200ul空白血浆？？

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2009/7/13 20:47:38 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

问题说的很长，回答的人较少，仔细看了后，条理还算清楚
绝对回收率好象听的很少，就像你说的：在液相色谱中，基质效应为0，而提取回收率等于绝对回收率。
我觉得，
1.就回收率来说，a法就可以
2.方法a和b中所乘的系数（1/0.8）好象因为你乙醚（乙酸乙酯等）1ml，涡旋，离心后，只取了0.8ml，一个换算系数
3.我觉得方法a中血药浓度应该是（180+20）的血浆近更好，因为吹干后是否有影响说不好，而且也干后存在溶解的问题

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