主题:【资料】HPLC常见问题和解决方法总汇

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HPLC常见问题和解决方法总汇!
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借花献佛喽!



操作压力的变化往往是故障的征兆。从下表中找出所观察到的现象,并在右侧的列表中参考相应的解决方法。

A        没有压力显示,没有流动相流动





解决方法


1、电源问题


1、接通电源,开机


2、保险丝被烧坏


2、更换保险丝


3、控制器设定不正确或设定失败


3a、采取恰当的设定

b、修理或更换控制器


4、柱塞杆折断


4、更换柱塞杆


5、泵头内有空气


5、溶剂脱气、启动泵抽出空气


6、流动相不足


6a、补充流动相

b、更换入口滤头


7、单向阀损坏


7、更换单向阀


8、漏液


8、拧紧或更换手紧接头


B        流动相流动正常,但没有压力显示





解决方法


1、仪表损坏


1、更换仪表


2、压力传感器损坏


2、更换压力传感器


C        压力持续偏高





解决方法


1、流速设定过高


1、调整流速设定


2、柱前筛板堵塞


2a、在允许情况下反冲色谱柱

b、更换筛板

c、更换色谱柱


3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀


3a、使用恰当的流动相

b、冲洗色谱柱


4、色谱柱选择不当


4、选择恰当的色谱柱


5、进样阀损坏


5、清洗或更换进样阀


6、柱温过低


6、提高温度


7、控制器失常


7、修理或更换控制器


8、保护柱阻塞


8、清洗或更换保护柱


9、在线过滤器阻塞


9、清洗或更换在线过滤器


D        压力持续偏低





解决方法


1、流速设定过低


1、调整流速


2、系统漏液


2、确定漏液位置并维修


3、色谱柱选择不当


3、选择恰当的色谱柱


4、柱温过高


4、降低温度


5、控制器失常


5、维修或更换控制器


E        压力不断上升





解决方法


1、见列表C


1、见列表C


F        压力降为零





解决方法


1、见列表AB


1、见列表AB


G        压力不断下降,但不回零





解决方法


1、见列表D


1、见列表D


H        压力波动





解决方法


1、泵中有气体


1a、溶剂脱气

b、从泵中除去气体


2、单向阀损坏


2、更换单向阀


3、泵密封损坏


3、更换泵密封


4、脱气不充分


4a、溶剂脱气

b、改变脱气方法(使用在线脱气法等)


5、系统漏液


5、确定漏液位置并维修


6、使用梯度洗脱


6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动




 

通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题,就必须将接头取下,检查是否损坏(例如,卡套损坏、密封表面有杂质);损坏的接头应该更换掉。

A        接头处漏液





解决方法


1、接头松动


1、拧紧


2、接头磨损


2、更换


3、接头过紧


3a、拧松,再重新拧紧

b、更换


4、接头被污染


4a、拆下清洗

b、更换


5、部件不匹配


5、使用同一品牌的配件


B        泵漏液





解决方法


1、单向阀松动


1a、拧紧单向阀(不必拧的过紧)

b、更换单向阀


2、接头松动


2、拧紧接头(不必拧的过紧)


3、混合器密封损坏


3a、更换混合器密封

b、更换混合器


4、泵密封损坏


4、维修或更换泵密封件


5、压力传感器损坏


5、维修或更换压力传感器


6、脉冲阻尼器损坏


6、更换脉冲阻尼器


7、比例阀损坏


7a、检查隔膜,如果漏液立即更换

b、检查手紧接头,损坏的立即更换


8、放空阀的损坏


8a、拧紧放空阀

b、更换放空阀


C        进样阀漏液





解决方法


1、转子密封损坏


1、重新安装或更换进样阀


2、定量环阻塞


2、更换定量环


3、进样口密封松动


3、调整


4、进样针头尺寸不合适


4、使用恰当的进样针


5、废液管中产生虹吸


5、保持废液管高于废液液面


6、废液管阻塞


6、更换或疏通废液管


D        色谱柱漏液





解决方法


1、尾端接头松动


1、拧紧接头


2、卡套内有填料


2、拆下、清洗卡套、重新安装


3、筛板厚度不合适


3、使用合适的筛板(参考下表)


筛板选择指导



物质粒径


筛板孔径


3-4u


0.5u


5-20u


2u


E        检测器漏液





解决方法


1、流通池垫片损坏


1a、避免过大的背景压力(压力降)

b、更换垫片


2、流通池窗破碎


2、更换窗口


3、手紧接头漏液


3、拧紧或更换


4、废液管阻塞


4、更换废液管


5、流通池阻塞


5、重新安装或更换


液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

A        峰拖尾





解决方法


1、筛板阻塞


1a、反冲色谱柱

b、更换进口筛板

c、更换色谱柱


2、色谱柱塌陷


2、填充色谱柱


3、干扰峰


3a、使用更长的色谱柱

b、改变流动相或更换色谱柱


4、流动相PH选择错误


4、调整PH值。对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰


5、样品与填料表面的溶化点发生反应图


5a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂

b、更改色谱柱


B        峰前延





解决方法


1、柱温低


1、升高柱温


2、样品溶剂选择不恰当


2、使用流动相作为样品溶剂


3、样品过载


3、降低样品含量


4、色谱柱损坏


4、见A1A2


C        峰分叉





解决方法


1          保护柱或分析柱污染



1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。


2、样品溶剂不溶于流动相


2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。


D        峰变形





解决方法


1、样品过载


1、减少样品载量


E        早出的峰变形





解决方法


1、样品溶剂选择不恰当


1a、减少进样体积

b、运用低极性样品溶剂


F        早出的峰拖尾程度大于晚出的峰





解决方法


1、柱外效应


1a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)

b、使用小体积的流通池


G        K’增加时,脱尾更严重





解决方法


1、二级保留效应,反相模式


1a、加入三乙胺(或碱性样品)

b、加入乙酸(或酸性样品)

c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)

d、更换一支柱子


2、二级保留效应,正相模式


2a、加入三乙胺(或碱性样品)

b、加入乙酸(或酸性样品)

c、加入水(或多官能团化合物)

d、试用另一种方法


3、二级保留效应,离子对


3、加入三乙胺(或碱性样品)


H        酸性或碱性化合物的峰拖尾





解决方法


1、缓冲不合适


1a、使用浓度50-100mM的缓冲液

b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液


I            额外的峰





解决方法


1、样品中有其他组份


1、正常


2、前一次进样的洗脱峰


2a、增加运行时间或梯度斜率

b、提高流速


3、空位或鬼峰


3a、检查流动相是否纯净

b、使用流动相作为样品溶剂

c、减少进样体积


J          保留时间波动





解决方法


1、温控不当


1、调好柱温


2、流动相组分变化


2、防止变化(蒸发、反应等)


3、色谱柱没有平衡


3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱


K        保留时间不断变化





解决方法


1、流速变化


1、重新设定流速


2、泵中有气泡


2、从泵中除去气泡


3、流动相选择不恰当


3a、更换合适的流动相

b、选择合适的混合流动相


L        基线漂移





解决方法


1、柱温波动。(即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。)


1、控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器



2、流动相不均匀。(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。)


2、使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气,使用中使用氦气。


3、流通池被污染或有气体


3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用盐酸)


4、检测器出口阻塞。(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线)


4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。


5、流动相配比不当或流速变化


5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。


6、柱平衡慢,特别是流动相发生变化时


6、用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。


7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成


7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂


8、样品中有强保留的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。


8、使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。


9、使用循环溶剂,但检测器未调整。


9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时,使用新的流动相。


10、检测器没有设定在最大吸收波长处。


10、将波长调整至最大吸收波长处


M      基线噪音(规则的)





解决方法


1、在流动相、检测器或泵中有空气


1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。


2、漏液



2、见第三部分。检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换泵密封。


3、流动相混合不完全


3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂


4、温度影响(柱温过高,检测器未加热)


4、减少差异或加上热交换器


5、在同一条线上有其他电子设备


5、断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。


6、泵振动


6、在系统中加入脉冲阻尼器


N        基线噪音(不规则的)





解决方法


1          漏液



1、见第三部分。检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封。检查流通池是否漏液。


2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成


2、检查流动相的组成。


3、流动相各溶剂不相溶


3、选择互溶的流动相


4、检测器/记录仪电子元件的问题


4、断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。


5、系统内有气泡


5、用强极性溶液清洗系统


6、检测器内有气泡


6、清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器


7、流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音。)


7、用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池


8、检测器灯能量不足


8、更换灯


9、色谱柱填料流失或阻塞


9、更换色谱柱


10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常


10、维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,建议不使用泵的混合装置


O        宽峰





解决方法


1、流动相组成变化


1、重新制备新的流动相


2、流动相流速太低


2、调节流速


3、漏液(特别是在柱子和检测器之间)


3、见section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。


4、检测器设定不正确


4、调整设定


5、柱外效应影响

a、柱子过载

b、检测器对反应时间或池体积响应过大

c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大

d、记录仪响应时间太长



5

a 小体积进样(例如:10ul而不是100ul)以1101100的比例稀释样品

b、减少响应时间或使用更小的流通池

c 使用内径为0.007-0.01的短管路

d、减少响应时间


6、缓冲液浓度太低


6、增加浓度


7、保护柱污染或失效


7、更换保护柱


8、色谱柱污染或失效,塔板数较低


8、更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰,则用强溶剂冲洗旧柱子。


9、柱入口塌陷


9、打开柱入口,填补塌陷或更换柱子


10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰


10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果


11、柱温过低


11、提高柱温。除非特殊情况,温度不宜超过75


12、检测器时间常数太大


12、使用较小的时间常数


P        分离度降低





解决方法


1、流动相污染或变质(引起保留时间变化)


1、重新配置流动相


2、保护柱或分析柱阻塞



2、去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞,可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏,建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在,进口可能阻塞了,更换入口处的筛板或更换色谱柱。


Q        所有的峰面积都太小





解决方法


1、检测器衰减设定过高


1、减少衰减的设定


2、检测器时间常数设定太大


2、设定较小的时间常数


3、进样量太少


3、增大进样量


4、记录仪连接不当


4、使用正确的连接


R        所有的峰面积都太大





解决方法


1、检测器衰减设定过低


1、采取较大的衰减


2、进样过多


2、减少进样量


3、记录仪连接不正确


3、正确连接记录仪


以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。

A        手动进样阀,转动不灵





解决方法


1、转子密封损坏


1、更换或调整转子密封


2、转子太紧


2、调整转子的松紧度


B        手动进样阀,载样困难





解决方法


1、进样阀安装不当


1、重新安装


2、定量环阻塞


2、清洗或更换定量环


3、进样器污染


3、清洗或更换进样器


4、管路阻塞


4、清洗或更换管路


C        自动进样阀,不能转动





解决方法


1、无压力(或电源)


1、提供恰当的压力(电源)


2、转子太紧


2、调整转子的松紧度


3、进样阀安装不当


3、重新安装


D        自动进样阀,其它问题





解决方法


1、阻塞


1、清洗或更换阻塞部件


2、机械故障


2、见随机维修手册


3、控制器故障


3、维修或更换控制器


由气味、景象和声音可以发现的问题

你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯,每天花上几分钟运用你的感官(除了味觉)来“感觉”你的液相色谱是否存在问题,这样可以帮助你迅速找到问题所在。例如:在你看到漏液之前,你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通过眼睛看到。

A        溶剂的气味





解决方法


1、漏液


1、见section 3


2、溅出


2a、检查废液瓶是否已满

b、找到溅出的部位并清洗干净


B        热气味





解决方法


1、仪器过热


1a、检查并调节通风设施

b、检查并调节温度设定

c、关掉仪器,查找维修手册


C        读数不正常





解决方法


1、压力不正常


1、见section 2


2、柱温箱问题


2

a、检查并调节设定

b、参照用户手册


3、检测器灯失效


3、更换灯


D        灯警告





解决方法


1、压力超出极限值


1

a、检查是否阻塞

b、检查并调节极限值的设定


2、其它警示灯


2、见用户手册


E        警告音





解决方法


1、溶剂泄漏/溅出


1、找到并解决


2、其它警告音


2、见用户手册


F        刺耳的短音或长音





解决方法


1、轴承失效


1、见用户手册


2、润滑不够


2、进行恰当的润滑


3、机械故障


3、见用户手册


常见故障及日常维护

下表中列出了液相色谱常见的一些问题,右侧中则列出的日常维护的方法可以减少问题出现的频率。括号中的数字是建议进行维护的时间间隔。用户手册则提供您更多的维护方法。

溶剂瓶







1、进口筛板阻塞


1

a、更换(3-6个月)

b、过滤流动相,0.5u滤膜


2、气泡


2、流动相脱气










1、气泡


1、流动相脱气


2、泵密封损坏


2、更换(3个月)


3、单向阀损坏


3、过滤流动相,运用在线过滤,准备备用单向阀


进样阀







1、转子密封损坏


1

a、不要拧的过紧

b、过滤样品


色谱柱







1、筛板阻塞


1a、过滤流动相

b、过滤样品

c、运用在线过滤或保护柱


2、柱头塌陷


2a、避免使用PH>8的流动相(针对大部分硅胶的柱子)

b、使用保护柱

c、使用预柱(饱和色谱柱)


检测器







1、灯失效,检测器响应降低,噪音增大


1、更换(6个月)或准备备用灯


2、流通池有气泡


2a、保持流通池清洁

b、池后使用反压抑制器

c、流动相脱气


一般







1、腐蚀/摩擦损坏


1、在不使用时保持系统缓冲液的清洁




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