实验目的：考察CNW Athena C18-WP 色谱柱的分离能力及与其他国产品牌在效能上的比较

实验方法：本实验以大白菜为本底进行添加回收实验，考察方法可行性及CNW Athena C18-WP 色谱柱的分离能力，并通过塔板数及分离度来对CNW Athena C18-WP 色谱柱和其他国产品牌色谱柱做一比较。

1. 材料

1.1. 样品来源：随机抽取的大白菜样品

1.2. 标准物质和主要试剂

1.2.1. 氨基甲酸酯类农药的标准物质：均来自天津农业部环境质量监督检验测试中心。七种氨基甲酸酯类农药分别为：涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭多威、三羟基克百威、涕灭威、克百威、甲萘威。浓度均为1000mg/L。

1.2.2. 柱后衍生化试剂：氧化剂(Cat．NO CB130)，Pickering公司；OPA稀释剂(Cat．NO CB910)，Pickering公司；巯基乙醇(Thiofluor)(Cat．NO 3700—2000)，Pickering公司；邻苯二甲醛(O—Phthaladehyde，OPA)，(Cat．NO 0120)Piekering公司；乙腈(色谱纯)，美国天地公司；甲醇 (色谱纯)，美国天地公司；氯化钠，沈阳化学试剂厂；CNWBOND NH2氨基 SPE 小柱，500mg/6mL，上海安谱科学仪器有限公司。

1.3.主要仪器：美国Agilent公司1200高效液相色谱仪(带荧光检测器)；美国PICKERING公司产VectorPCX型柱后衍生仪；食品加工器；旋涡混合器；匀浆机；氮吹仪；分析实验室其他常用仪器设备。

2. 样品前处理

2.1.试样制备：按照GB/T 8855抽取大白菜样品，取可食部分，经缩分后，将其切碎，充分混匀放入食品加工器粉碎，制成待测样，放入样品盒中保存。

2.2.添加标准物质：将七种氨基甲酸酯类标准物质配制成10mg/L的混合标准物质。准确称取4份25.0g样品于烧杯中，其中1份作为空白样品，向其余3份中加入125μL作为平行的添加回收样品。

2.3.提取：向4份样品中加入50.0mL乙腈，在匀浆机中高速匀浆2min后，用滤纸过滤，滤液收集到装有5g～7g氯化钠的100mL具塞量筒中，收集滤液40mL～50 mL，盖上塞子，剧烈震荡1min,在室温下静置30min，使乙腈相和水相分层。

2.4.净化：从100mL具塞量筒中准确吸取10.00mL乙腈相溶液，放入100mL烧杯中，将烧杯放在70℃水浴锅上加热，烧杯内缓缓通入氮气流，将乙腈蒸发近干；加入2.0mL甲醇+二氯甲烷（1+99）溶解残渣，盖上铝箔，待净化。将氨基柱用4.0 mL甲醇+二氯甲烷（1+99）预洗条件化，当溶剂液面到达吸附层表面时，立即加入上述待净化溶液，用15mL离心管收集洗脱液，用2mL甲醇+二氯甲烷（1+99）洗烧杯后过柱，并重复一次。将离心管置于氮吹仪上，水浴温度50℃，氮吹蒸发近干，用甲醇准确定容至5.0mL。在混合器上混匀后，用0.2μm滤膜过滤，上机测定。

2.5.标准工作溶液配制：将10mg/L的混合标准物质溶液用甲醇稀释为0.05mg/L的混合标准工作溶液。

2.6.色谱条件

2.6.1. 色谱柱：CNW Athena C18-WP 4.6mm*250mm，5μm。

2.6.2. 柱温：42℃。

2.6.3. 荧光检测器，λex330 nm, λem465 nm。

2.6.4. 溶剂梯度与流速见表1

表1 溶剂梯度与流速

2.6.5. 柱后衍生

2.6.5.1. 0.05mol/L 氢氧化钠溶液，流速0.3mL/min。

2.6.5.2. OPA试剂，流速0.3mL/min。

2.6.5.3. 反应器温度

水解温度，100℃；衍生温度，室温。

2.7. 色谱分析：分别吸取20.0μL标准混合溶液和净化后的样品溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以样品溶液峰面积和标准溶液峰面积比较定量。

3. 结果分析

3.1.1. 回收率见表2

表2 七种氨基甲酸酯类农药在大白菜中的回收率

计算结果表明，七种氨基甲酸酯类农药的回收率在80%至98%之间，符合标准要求。

3.1.2. 色谱图

为比较不同色谱柱的效能指标，分别将0.05mg/L的混合标准工作溶液通过CNW Athena C18-WP色谱柱和其他某国产品牌相同类型色谱柱分析得到两张色谱图。通过工作站软件直接计算得到的效能指标比较色谱柱性能。见图1和图2。

图1 0.05mg/L混合标准溶液在CNW Athena C18-WP色谱柱上的色谱图

图2 0.05mg/L混合标准溶液在其他某国产品牌色谱柱上的色谱图

4. 讨论

4.1.实验方法分析七种氨基甲酸酯类农药的添加回收结果符合标准要求，满足了日常检测工作的需要。

4.2.七种氨基甲酸酯类农药在CNW Athena C18-WP色谱柱上得到了较好的分离，具有很高的分离度与灵敏度。

4.3.在与其他某国产品牌色谱柱性能比较上，在塔板数和分离度等重要指标上，CNW Athena C18-WP色谱柱都有非常明显的优势，塔板数和分离度高于其他某国产品牌色谱柱的2至3倍；并且CNW Athena C18-WP具有更低的基线漂移。结合适宜的价格，CNW Athena C18-WP色谱柱是一款性价比极高的色谱柱。

4.4.建议：如今核壳色谱柱技术发展很迅速，希望安谱能提供更多类型的核壳色谱柱供用户们选择。