主题：【求助】样品峰面积随色谱条件变化的原因

原文由 xxx2810615(xxx2810615) 发表:

敢问楼主的目标化合物是呈弱酸性的么？

原文由 dywzqbx(dywzqbx) 发表:

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敢问楼主的目标化合物是呈弱酸性的么？

是的，化药中的盐酸盐类

原文由 浪淘沙隐(zhoujin83) 发表:

之前有版友提到的盐类化合物在HPLC中是以游离态还是结合态存在的问题，有版友说看色谱条件。我当时也认为是以游离态存在的，后来仔细想想觉得还是很有可能以盐存在的。如果确实是以盐存在的，那么现在就好解释了，因为楼主的化合物是盐酸盐，流动相为碱性，那么在流动相中应该是以游离碱存在的；流动相pH为2.5，那么可能就以结合态存在，改变了其折光系数，导致峰面积发生变化？

原文由 xxx2810615(xxx2810615) 发表:

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敢问楼主的目标化合物是呈弱酸性的么？

是的，化药中的盐酸盐类

峰面积不是时间和瞬时响应的积分值么？那么问题就简单了，影响时间或者瞬时响应就影响峰面积呗。

流动相流速：浓度型检测器的瞬时响应与流速无关（别问我为什么，我也纳闷着呢，求解答），而小流速下，样品通过流通池的时间变长，峰面积就变大，峰还变宽了呢。

流动相比例：流动相比例改变主要改变PH值和极性（还有没有？）。

流动相极性改变：在反相柱中，固定相都是弱极性或非极性载体，吸附的也是一些弱极性的物质，当流动相极性变大（比如缓冲盐比例增高），就难洗脱，保留时间变大，峰面积会大一些。

PH值：PH值的改变影响化合物的形态，在RI检测器时如@浪淘沙隐 同学说的那样。

PH值小，抑制楼主弱酸性样品的电离，样品以分子形式存在；PH值大，电离程度高，则化合物以分子和离子混合的形式存在，要检测的化合物物浓度就降低，瞬时响应降低，峰高应该会低吧。据说，有时候这样会出杂峰，不知楼主情况怎么样？另外，有的化合物离子和分子可以同时出峰，比如我们检测的苯甲酸啦，山梨酸啦等等。

其他：像柱子的填料，规格都会影响柱子的保留能力，从而对峰面积造成影响（不是说保留时间直接影响积分面积，我想着是相对情况下，保留时间短了，其通过流通池的时间会稍小，不知道对不对）

进样浓度就不用说了。

还有检测器？比如DAD氘灯的能量会影响瞬时响应大小。

————————————————————————————————

肯定有许多不对的地方，欢迎批评指正。

原文由 dywzqbx(dywzqbx) 发表:

原文由 xxx2810615(xxx2810615) 发表:

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敢问楼主的目标化合物是呈弱酸性的么？

是的，化药中的盐酸盐类

峰面积不是时间和瞬时响应的积分值么？那么问题就简单了，影响时间或者瞬时响应就影响峰面积呗。

流动相流速：浓度型检测器的瞬时响应与流速无关（别问我为什么，我也纳闷着呢，求解答），而小流速下，样品通过流通池的时间变长，峰面积就变大，峰还变宽了呢。

流动相比例：流动相比例改变主要改变PH值和极性（还有没有？）。

流动相极性改变：在反相柱中，固定相都是弱极性或非极性载体，吸附的也是一些弱极性的物质，当流动相极性变大（比如缓冲盐比例增高），就难洗脱，保留时间变大，峰面积会大一些。

PH值：PH值的改变影响化合物的形态，在RI检测器时如@浪淘沙隐 同学说的那样。

PH值小，抑制楼主弱酸性样品的电离，样品以分子形式存在；PH值大，电离程度高，则化合物以分子和离子混合的形式存在，要检测的化合物物浓度就降低，瞬时响应降低，峰高应该会低吧。据说，有时候这样会出杂峰，不知楼主情况怎么样？另外，有的化合物离子和分子可以同时出峰，比如我们检测的苯甲酸啦，山梨酸啦等等。

其他：像柱子的填料，规格都会影响柱子的保留能力，从而对峰面积造成影响（不是说保留时间直接影响积分面积，我想着是相对情况下，保留时间短了，其通过流通池的时间会稍小，不知道对不对）

进样浓度就不用说了。

还有检测器？比如DAD氘灯的能量会影响瞬时响应大小。

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肯定有许多不对的地方，欢迎批评指正。

首先，感谢您认真的回复。

对于"峰面积不是时间和瞬时响应的积分值么？那么问题就简单了，影响时间或者瞬时响应就影响峰面积"

我没有仔细研究过，我理解下的时间对应峰宽，瞬时时间响应值对应峰高。

一个样品，如果通过改变色谱条件后，例如时保留时间增加，峰宽变宽，就是说流经检测器的时间变长，那么对应的每一秒下对应的浓度应该会降低，而峰响应应该也会降低。这些色谱条件的因素改变的更明显的应该是峰形，而峰面积则应该只与样品的量有关，同一样品总的峰面积应该是恒定·····

我觉得我好像是把自己绕进出，出不来了。