液相流动相A、B相均由乙腈-甲醇-缓冲溶液组成,只是比例不一。但是配置得到的不同批次流动相,在分离目标体系(比较复杂)时,峰的分离结果不一
90min的梯度洗脱程序,在50-55min区段内两峰理想时R=1.0,不理想时两峰共洗脱成一个峰。
流动相配置时:
为了减少批次间的差异,用容量瓶进行缓冲盐溶液的配置(缓冲体系是KH2PO4-H3PO4)
每次调节pH前均会校准pH计
量取乙腈、甲醇和缓冲盐时用同一量筒以确保比例的准确
因为分离结果直接与不同批次有关,不存在同一批次的流动相分离结果有好有坏,所以应该不会是柱效的降低、流动相脱气不充分等问题
想请问造成不同批次流动相下分离效果差异的原因还有哪些,出现这样的问题是不是说明缓冲体系的缓冲容量不够呢?应该怎么解决?
Ps:
Buffer: 10.2 g of monobasic potassium phosphate in a 1000-mL volumetric flask. Dissolve in 950 mL of water. While stirring, adjust with phosphoric acid to a pH of 3.1, and dilute with water to volume.
Solution A: Acetonitrile, methanol, and Buffer (20:5:75)
Solution B: Acetonitrile, methanol, and Buffer (20:30:50)