主题：【分享】色谱分析中各种图谱现象的判断

色谱分析中各种图谱现象的判断
可能产生的原因及处理办法
一.基线噪音
1 流动池脏，用极性试剂清洗。当有填料进入，拆开流通池。
2 检测器灯有问题，如能量偏低，更换氘灯。
3 周期性的波动，则起源于泵的脉冲，检修泵或更换垫片等。
4 温度对检测器的影响，控制温度。
5 气泡经过检测器，用大流量冲洗。
6 可能难出峰的样品连续不断出来，用强极性流动相冲柱。
7 流动相本底高，如水的纯度不够，换超纯水。或试剂纯度不够，换色谱纯的试剂。
二.基线漂移（上漂和下漂）
1 柱中的流动相没有平衡，延长平衡时间，尤其在流动相中添加了有紫外吸收的添加剂。
2 在梯度洗脱中，基线上漂是正常的，在空白梯度中有可能是柱子中有杂质洗出。其次是流动相中有干扰物，换流动相。
3 温度不稳定（示差检测器），控温。
4 在等度分析中，样品缓慢洗出，改变淋洗液强度或用梯度分析。
5 样品进入检测器，吸附在池中，可能每进样一次，本底一次比一次高，很少见。
三.倒峰的产生和消除
1.柱切换的脉冲效应，一般不是很明显，必要时考虑换阀。
2.在低波长分析时，流动相本底比较高时，而样品用本底低的流动相溶解，肯定出现倒峰，其程度同进样量和本底差有关。解决办法，用流动相溶解样品，减少进样量，消除倒峰的影响。高波长时,影响比较小。
3.如果倒峰不影响峰的分离，对外标法定量不影响。但影响面积归一化法。
4.样品中有比流动相本底低的物质存在，如无机盐等，将出倒峰。这种情况下，倒峰的位置不一定在死体积位置出现（大多数在死体积位置出现）。
四.鬼峰的产生和消除
1.样品分析时峰没出完，在下一针或下下一针出现，判断办法，延长分析时间，计算可能出现的保留时间。然后调整流动相。
2.连续进样，在某个位置出现忽高忽低的峰，最可能是进样针污染，清洗进样针，注意污垢的干扰，有些样品易残留在针管里。可重新取样分析。
3.定量管污染，处理方法同上。
4.在死体积位置出现的小峰，可能是柱切换造成的。
5.流动相与样品溶剂不一致，也会出现鬼峰，尤其在低波长时，出现位置在死体积的地方。
6.气泡，如果有小气泡通过流通池，也出现随机的假峰，大气泡存在，其出现的峰往往直上直下，脱气解决。
7.样品发生变化反应，重新取样快速分析。
五.峰前移或退后的判断
1.有规律的变化一般可能是流动相没平衡，如低浓度的缓冲液或离子对试剂，样品对pH变化极敏感。
2.温度变化，当天气变化快，分析时间长，比较明显，用柱温箱，空调解决此类问题。
3.流动相挥发，尤其用挥发性的酸时，时间长了酸度会发生变化，流动相新鲜配置。
4.仪器尤其泵的运行时间长后，重现性不好，仪器老化，在梯度分析时尤其明显，也可能流速不稳，或有气泡。
5.在分析某样品后，柱子可能发生改性，再次分析重现性变差，清洗或再生柱子。
6.进样浓度不一，溶剂不一，也会造成保留时间不一致。
六.前沿峰和拖尾峰的判断和处理
前沿峰的产生和处理（As小于0.9)
1.色谱柱漏穿，柱效明显偏低，柱压偏低，如所有峰都出现，换柱。
2.样品溶剂极性远大于流动相，局部改变了流动相平衡体系，办法是减少进样量，更换样品溶剂。
3.分离不完全，有大量峰重叠，（如系列物），办法，改变流动相，采用梯度洗脱。
拖尾峰的判断和处理（As大于1.2）
1.色谱柱柱头塌陷，有死体积，柱效明显下降，所有峰都如此，换柱。
2.色谱柱填料流失，例如C18在碱性流动相中，一般是使用较长时间后造成的，换柱。
3.用C18柱分析碱性化合物，可用BDS柱或未端封尾柱，或在流动相中添加减尾剂（三乙胺等）。
4.过载或超载，减少样品浓度和进样量。
5.保留性太强，出峰太迟，办法，增加洗脱强度。
6.管路有死体积，或连接管路太长，或在管路中有保留。
7.在分离过程中，可能发生结构变化，或存在结构互变，办法，用其它分析体系。
8.分离不完全，后面带有小峰，采用梯度或改变流动相。
9.样品溶解体系同流动相不匹配，样品在柱子中析出。
七.色谱双峰的判断
1.柱头或筛板堵塞，污染，处理办法，清洗筛板或对柱头填料修补。
2.溶剂极性太强或在二相中差异太大，换溶剂，或减少进样量。
3.过载，减少进样量，或进样体积。
4.样品的溶解度，样品难溶于流动相时，会出现双峰。
5.存在互变异构现象，双峰基本齐平。
6.样品存在动态反应，如酸与盐（间苯甲酸与间苯甲酸钠），在特定pH条件下会出双峰。
7.确实是二个组分混合在一起，改变流动相体系。
八.色谱峰变胖的判断和处理
1.死体积增加，如管路和连接管，可能用粗的代替细的，解决办法，缩短连接管路，用细管。
2.柱效降低，色谱柱受损，换柱。
3.流动相不合理，单一如只用甲醇水体系，没有添加改性剂，pH调节剂，也可能柱子选择有问题。一般除了非极性化合物外，流动相中建议都加盐等化合物，可以提高化合物的分离柱效。
4.溶解与分离体系不一致，如用乙醇溶解样品在甲醇体系中进样，会造成峰位移和峰变宽。
5.大体积进样，在分析柱中进样超过100ul。
6.柱和仪器匹配不合理，如2.1mm内径的色谱柱（包括一体化的柱子，检测器的死体积问题），其管路要求比较细，4.6mm做的好的，2.1的就不行。