主题：【讨论】看图解读畅谈之六：正反相液相色谱分析法——实例列举经验畅谈

原文由 vm88(v2826867) 发表:
反相有什么柱子？多用于什么项目检测？

反相色谱柱类型很多，C4/C8/C18，苯基柱，离子交换柱等，做的项目也很多，医药、食品、化工、环境等领域都可能涉及

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什么时候用正相，什么时候用反相？

原文由 zyl3367898(zyl3367898) 发表:
什么时候用正相，什么时候用反相？

不溶于水而溶于非极性溶剂，极性较大，在碳载量较小的反相柱上没有保留并且极性较大的组分，一般用于正相色谱法分析。
极性较弱溶于水并且溶于极性溶剂的组分，一般用于反相色谱法分析。

反相离子对色谱法：
当待测物的酸性或碱性足够强以至于加酸或碱都不能使其在柱上有所保留时，才考虑加离子对试剂，目的是增强目标物保留作用，使目标物得到检测。
离子对试剂主要是应用与一些电离比较强的一些离子化合物，加入的离子对试剂与目标离子化合物形成中性的分子态物质，这样大大增强了该目标离子化合物的保留能力．
分析碱性物质常用的离子对试剂为烷基磺酸盐，如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等。
分析酸性物质常用四丁基季铵盐，如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐。

反相离子抑制色谱法;
流动相的pH值应该避开待物pKa值两个单位，否则可能会引起保留时间波动较大或是峰型不好。
流动相pH值对保留时间的影响是因待测物性质的不同而不同，简单如下：酸性药物，pH减小，K增大；碱性药物，pH减小，K减小；中性药物，影响较小。
k越大，说明固定相对此组分的容量越大，出柱慢，保留时间越长。

反相离子抑制色谱法：
分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。
对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；
对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。
  注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除尾剂。

各种PH值的磷酸盐缓冲液配制（资料分享）

磷酸盐缓冲液
    取磷酸二氢钠38.0g，与磷酸氢二钠5.04g,加水使成1000ml,即得。
磷酸盐缓冲液(pH2.0)
        甲液:取磷酸16.6ml，加水至1000ml，摇匀。乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液72.5ml与乙液27.5ml混合，摇匀，即得。 
磷酸盐缓冲液(pH2.5)
        取磷酸二氢钾100g，加水800ml，用盐酸调节pH至2.5,用水稀释至1000ml。
磷酸盐缓冲液(pH5.0)
        取0.2mol/L磷酸二氢钠溶液一定量,用氢氧化钠试液调节pH值至5.0，即得。
磷酸盐缓冲液(pH5.8)
        取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g,加水使溶解成1000ml，即得。       
磷酸盐缓冲液(pH6.5)
        取磷酸二氢钾0.68g,加0.1mol/L氢氧化钠溶液15.2ml，用水稀释至100ml，即得。 
磷酸盐缓冲液(pH6.6)
        取磷酸二氢钠1.74g、磷酸氢二钠2.7g与氯化钠1.7g，加水使溶解成400ml，即得。
磷酸盐缓冲液(含胰酶)(pH6.8)
        取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8；另取胰酶10g，加水适量使溶解，将两液混合后,加水稀释至1000ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH6.8)
        取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，摇匀，即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.0)
        取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1ml，用水稀释至100ml，即得。 
磷酸盐缓冲液(pH7.2)
        取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液50ml与0.2mol/L氢氧化钠溶液35ml，加新沸过的冷水稀释至200ml，摇匀，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.3)
        取磷酸氢二钠1.9734g与磷酸二氢钾0.2245g,加水使溶解成1000ml，调节pH值至7.3，即得。 
磷酸盐缓冲液(pH7.4)
        取磷酸二氢钾1.36g， 加0.1mol/L氢氧化钠溶液79ml，用水稀释至200ml，即得。   
磷酸盐缓冲液(pH7.6)
        取磷酸二氢钾27.22g，加水使溶解成1000ml，取50ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液42.4ml，再加水稀释至200ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.8)
        甲液：取磷酸氢二钠35.9g，加水溶解，并稀释至500ml。
    乙液：取磷酸二氢钠2.76g，加水溶解，并稀释至100ml。取上述甲液91.5ml与乙液8.5ml混合，摇匀，即得。   
磷酸盐缓冲液(pH7.8～8.0)
        取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使溶解成1000ml，即得。

现在多数用的反相吧

原文由 xiaolanfish(xiaolanfish) 发表:
现在多数用的反相吧

好像反相用的更多一些