三七是一珍贵的中草药材，珍贵程度接近于人参（三七中也同样含有人参中的某些成分）。液相色谱法检测三七中的主要成分要求也是比较高，检测难度也是相当大的。其中检测波长是203nm，在这个条件下液相色谱仪使用的紫外灯（一般是氘灯）能量不是最高；流动相是乙腈和水，这两种流动相在这个波长处有很强的紫外吸收，这样检测背景就会很高，不稳定因素也会很多；又是采用梯度洗脱方式，乙腈含量是从19%开始；检测时间较长，一般都得60多分钟。这样的条件在液相色谱中算是很高的条件，它可能会带来噪声大，漂移严重，重复性不理想等很多问题。这就对实验条件和仪器等很多实验环节提出了较高的要求。
下面就具体看看检测过程吧。
实验分析部分
实验原理
供试品于锥形瓶中，加甲醇回流提取，过滤，滤液置中性氧化铝固相萃取柱上，收集洗脱液，吹干，残渣加甲醇溶解定量，过滤，滤液色谱柱进行色谱分离，紫外检测器检测，保留时间定性，峰面积定量（外标法）计算出三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量。
实验所用仪器
高效液相色谱仪(配紫外检测器，柱恒温箱，二元梯度系统，脱气机)
超声波振动仪
溶剂过滤器
固相萃取装置
回流提取装置
氮吹仪
分析天平
实验所用试剂
甲醇（色谱纯）
乙腈（色谱纯）
正丁醇（分析纯）
乙醇（分析纯）
二次蒸馏水
对照品溶液
三七皂甙R1标准品
人参皂甙Rg1标准品
人参皂甙Rb1标准品
色谱条件
检测器：紫外检测器
色谱柱:Promosil C18 ( 250 mm × 4.6 mm，5μ )
检测波长：203nm
流动相：乙腈（A）：水（B）
总流速：1.0ml/min
柱温：30℃
进样量：10ul
梯度表:乙腈（A）∶水（B）=（v/v）

	时间(min)	乙腈（A）%	水（Ｂ）%
1	0	19	81
2	12	19	81
3	60	36	64
4	61	80	20
5	80	80	20
6	81	19	81
7	90	19	81

色谱图
对照品色谱图

供试品色谱图

药典中的梯度方法没有以上梯度表中4、5、6、7步，这在具体检测中可能会出现很多问题。比如连续进样，可能就第一针出峰较正常，其余的不是有的组分不出峰，就是定性、定量重复性差，还有可能基线在很长时间内漂移不定等严重影响检测结果。加上这几步问题一般很少出现。这几步在高效液相色谱梯度洗脱检测方法中非常重要。我们一般把类似4、5步（梯度过程结束后把流动相中有机相含量提高到一个较高的状态）过程叫做色谱柱再生过程，主要是为了把色谱柱中未洗脱掉的杂质彻底洗脱掉，重新恢复色谱柱的功效。类似6、7步（流动相组成恢复到梯度洗脱的初始状态）过程我们一般叫系统再平衡过程，目的是为了保证下一次进样系统是一个平衡、稳定的状态。这两步都是为了下一次进样色谱柱及整个系统都处于一个良好的状态（和第一针进样时一样的状态），为了保证多次进样色谱条件一致，检测结果更准确。
结论
本方法检测三七药材非常适合。同时检测多种复杂组分结果具有分离度、重复性等指标都很理想的良好效果，检测结果准确、可靠，方法具有简单、实用、分析时间短等众多优点。
该方法是一种理想的检测三七药材中三七皂甙R1、人参皂甙Rg1、人参皂甙Rb1的高效液相色谱法。值得借鉴、参考。

该帖子作者被版主 又又1990加 30积分， 2经验，加分理由：第八届原创大赛积分奖励