主题：【第八届原创】动物源性食品中β-受体激动剂检测的固相萃取方法

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发表于：2015/08/14 17:13:12 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

动物源性食品中β-受体激动剂检测的固相萃取方法

一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为猪肉样品的前处理方法，LC-MS/MS法作为检测手段。该方法可简化猪肉样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

五种β-受体激动剂物质:克仑特罗(CAS:37148-27-9),沙丁胺醇（CAS:18559-94-9），莱克多巴胺（CAS：97825-25-7）,特布他林(CAS:23031-25-6),妥布特罗(CAS:41570-61-0)。

三、应用范围

本方法适用于动物源性食品中β-受体激动剂LC-MS/MS检测及确证。

四、参考标准

推荐性国家标准《GB/T 21313-2007 动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法》

五、实验材料
MCX固相萃取柱6mL/200mg。
六、实验方法
1、样品提取
称取均质试样10.0ｇ试样（精确至0.01ｇ），加入15mLpH 5.2的乙酸-乙酸铵缓冲溶液，1000 r/min 匀浆1 min，再加入β-噗糖醛酸苷肽酶/芳香磺酸酯酶溶液100 μL，于37℃±1℃振荡酶解过夜。取出冷却后，10℃9500 r/min离心10 min。取全部上清液，待净化。
2、SPE柱净化
(1)活化：加入6mL5%甲醇氨、6mL甲醇、6mL水、6mL 0.1mmol/L高氯酸（pH 4.0）溶液活化。
(2)上样和洗脱：当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，过柱，弃去滤液，用2mL甲醇、2mL 2%甲醇水溶液淋洗，最后用7mL5%甲醇氨洗脱。
(3)重新溶解：洗脱液缓慢氮气流条件下吹至近干，用甲醇-0.1%甲酸水溶液溶解定容至1.0mL，涡旋混匀1min，用于LC-MS/MS测定。
4、LC-MS条件
色谱柱：Venusil ASB C18（2.1×150mm，5µm，100Å）；
质谱仪：API 4000
流动相：A:10mM乙酸铵（0.1%甲酸）溶液 B:甲醇溶液；

表1梯度洗脱条件

时间/min	B/%	A/%
0.00	5	95
4.00	50	50
6.00	10	90
8.00	95	5
8.01	5	95
12.00	Stop

流速：0.2mL/min
柱温：40℃
进样体积:2μL
离子源：电喷雾（ESI），正离子模式
检测方式：多反应监测（MRM）

表2质谱仪离子源参数

Source/Gas
Collision Gas(CAD)	10
Curtain Gas(CUR)	30
Ion Source Gas 1(GS 1)	50
Ion Source Gas 2(GS 2)	50
Ion Spray Voltage(IS)	5500
Temperature(TEM)	550
Interface Heater(ihe)	On

表3β-受体激动剂的母离子和子离子参数表

物质名称	保留时间（min）	监测离子对	DP	EP	CE	CXP
沙丁胺醇	3.86	240.1/147.8	60	10	18	12
沙丁胺醇	3.86	240.1/221.9	60	10	12	12
克伦特罗	5.82	277.1/202.9	60	10	23	12
克伦特罗	5.82	277.1/259.0	60	10	15	12
莱克多巴胺	5.45	302.1/163.7	60	10	23	12
莱克多巴胺	5.45	302.1/284.2	60	10	19	12
特布他林	3.77	226.0/151.7	60	10	16	12
特布他林	3.77	226.0/169.8	60	10	12	12
妥布特罗	6.17	227.9/153.8	60	10	16	12
妥布特罗	6.17	227.9/171.8	60	10	12	12

七、实验结果
1、0.5 ppb猪肉基质加标回收结果：

五种待测物的回收率均大于80%，RSD值小于5，符合标准要求。

表4猪肉中0.5ppb加标回收实验结果

名称	1（%）	2（%）	3（%）	平均回收率（%）	RSD（%）
沙丁胺醇	88.62	82.79	81.45	84.29	4.52
克伦特罗	85.32	88.29	86.59	86.73	1.72
莱克多巴胺	86.56	88.33	81.36	85.42	4.24
特布他林	81.95	80.95	87.26	83.39	4.06
妥布特罗	82.64	82.56	88.14	84.45	3.79