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主题：【分享】梯度洗脱（一）：初识

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发表于：2015/12/03 23:07:36 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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梯度洗脱是我们分析测试中最常用的方法，相对于等度洗脱而言，梯度洗脱分析速度快，能够达到一个很好的分离度，但是梯度洗脱的方法也是比较复杂的，影响因素也很多，这一期初步了解一下等度洗脱和梯度洗脱的区别


1等度洗脱
所谓等度洗脱就是方法运行时流动相的比例保持不变，如figure 1

可以发现随着有机相比例的减少，保留时间延后，分离度增加，同一梯度内，后出峰的峰会变宽。
等度洗脱的方法比较简单：
  • 方法开发比较简单，可以逐渐改变有机相比例，寻找合适的分离度，譬如从90%开始，80%，70%，一步步的做下去，保留时间也可以预测。之前提到过“三倍法则”：有机相比例每变化10%，保留因子k就变化3倍，k等于（t-t0）/t-t0,如figure 1,柱子规格是100 mm × 4.6 mm ，流速是 2 mL/min，那么t0等于0.5*10*0.46*0.46/2，约等于0.5min，那么60%和50%的k分别是 7和19,1，大约是3倍的关系，所以对于等度洗脱的方法，可以容易的预测保留时间随有机相的变化幅度

  • 流速，柱子规格的变化对于等度方法的分离度影响不大。
2梯度洗脱
所谓梯度洗脱就是方法运行时，流动相的比例随着时间的变化而变化，
如figure 2


可以发现，随着运行时间的增加，梯度变缓，分离度增加，但同一梯度内，所有的峰的峰宽是一致的，这一点与等度洗脱是不一样的。
梯度洗脱的方法比较复杂
  • 不符合三倍法则，其保留因子k* ≈ (t G × F)/(Δ%B × V m × 5)，与柱体积，流速和梯度时间都有关

  • 方法的开发要考虑梯度的初始比例，变化梯度和运行时间，还要考虑平衡时间，与系统的dwell volume 有关。
3是等度梯度还是梯度洗脱
简单而言，可以应用25%/40%的法则判断，根据第一峰出现到最后一个峰流出所用的时间占总运行时间的比例，如果小于25%，建议用等度洗脱，如果大于40%，建议用梯度洗脱，如果在两者之间，两种方法都可以 。
譬如下面的例子：

a图中，(17-13)/20 = 20%，小于25%，建议用等度洗脱，
b图中，(16-7)/20 = 45%，建议用等度洗脱
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2015/12/6 10:39:39 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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