主题：【原创】[月旭产品活动：1月份]高效液相色谱法测定红茶中着色剂

高效液相色谱法测定红茶中着色剂

摘要：建立高效液相色谱仪测定红茶中日落黄、柠檬黄、苋菜红、胭脂红、诱惑红的方法。样品经过水-乙醇溶液溶解，经过固相萃取小柱（月旭Welchrom® PA，1g/6mL；货号WSP050306）中吸附洗脱，所得的洗脱液经C18柱色谱柱（月旭Ultimtae XB-C18, 4.6×250 mm, 5μm；货号：00310-02043，序列号：w13211570）进行分离，流动相为甲醇-0.02mol/L乙酸铵溶液以不同比例进行梯度洗脱，先采用紫外检测器的254nm进行5种同时测定，然后对有日落黄等检出的结果进行最大吸收波长的测定验证。.
关键词：高效液相色谱仪、红茶、合成色素
检验依据：
GB/T 5009.35-2003食品中合成着色剂的测定 ；
GB/T 21916-2008水果罐头中合成着色剂的测定 高效液相色谱法；
SN/T 1743-2006食品中诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的含量检测 高效液相色谱法；

1 试验部分
1.1 仪器与试剂
1.1.1仪器
安捷伦1100高效液相色谱仪，配紫外检测器；密理博超纯水机；超声波消洗器；固相萃取仪（配固相萃取柱：月旭Welchrom® PA，1g/6mL；货号WSP050306）
1.1.2试剂
甲醇、乙酸铵均为色谱级；试验用水为超纯水
柠檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红、诱惑红标准储备液：10ug/mL

1.2实验条件

色谱条件：色谱柱：月旭Ultimtae XB-C18, 4.6×250 mm, 5μm；货号：00310-02043，序列号：w13211570，柱温40℃；流量1mL/min；进样量10uL;检测波长：254nm。流动相：A为甲醇，B为0.02moL乙酸铵溶液。梯度洗脱程序见下表：

1.3试验方法
红茶样品经粉碎后备用。称取粉碎均匀试样5.00g于刻度离心管中，加乙醇-氨水-水（80+1+19）溶液10mL，涡旋振荡5min，静置放置一小时后进行再涡旋振荡5min，3000r/min离心10min,干过滤收集滤液，将剩余的残渣重复提取二次，最后洗涤残渣二次，每次约用甲醇水溶液5mL,将收集的全部滤液（约40mL）至于80℃水浴加热浓缩至5mL,为试样溶液待SPE净化。
1）活化：5mL甲醇、5mL水，5mL pH=6的水；
2）上样：加入样液，控制流速，不宜过快；
3）淋洗：10mL pH=4的水，20mL甲醇-甲酸（ 6/4）洗去天然色素，10 mL pH=7的水洗至中性；
4）洗脱：15mL氨水-乙醇-水（ 2+7+1）洗脱，收集洗脱液，将洗脱液置于80度水浴挥干，用水定容至5mL，上机测定。
1.4标样与样品检测的色素的色谱图
按设定好的仪器条件，对标准样品进行了分析测定，其柠檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红色谱图如下：

1.5红茶假阳性的判别

红茶由于含有大量的氨基酸、咖啡碱、天然色素等物质，这些物质都干扰了红茶中人工合成着色剂的测定，很容易出现假阳性色谱图。因此考虑使用着色剂的各自最大吸收波长进行验证与排除。样品实验表明，在液相色谱的紫外检测器的254nm时，红茶都会在日落黄的保留时间内都出现很大的假阳性色谱峰；而在液相色谱紫外检测器波长设为日落黄最大吸收波长480nm测定时，则无色谱峰，因此，红茶紫外检测在254nm下测定日落黄会出现假阳性。

3.样品的加标回收试验：
样品及样品的加标回收试验按上述1.2及1.3的条件进行试验，检测波长为480nm，样品均未检出合成色素，
加标试验见表2。

从上表可以看出：使用月旭Welchrom® PA，1g/6mL；货号WSP050306固相萃取小柱，及色谱柱：月旭Ultimtae XB-C18, 4.6×250 mm, 5μm；货号：00310-02043，序列号：w13211570取得了较好的分析效果，回收率在（86~95）之间，较国标的分散萃取操作简单，方便，回收率也有极大的改善。