主题：【原创】腐乳中二甲基黄和二乙基黄的测定解决方案

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发表于：2016/03/22 17:26:09 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

腐乳中二甲基黄和二乙基黄的测定解决方案
二甲基黄和二乙基黄，属于工业染剂，主要用于石蜡、塑胶、印刷油墨、石油和肥皂等的着色，具有致癌性。因其不属于食品添加剂范畴，从未列入台湾监控部门的常规检查项目，被当地不法商人利用至今。目前，关于该类物质的测定方法几乎没有报道。
方法优势：
迪马科技建立固相萃取-超高效液相色谱串联质谱法同时检测腐乳中二甲基黄和二乙基黄，本方案具有

以乙腈为提取液，采用ProElut DYC固相萃取柱净化样品，通过UPLC- MS/MS检测；
前处理步骤简单、净化效果好、回收率高、基质效应小优点；
保证实验结果准确性、重现性。方法检出限0.03 μg/kg，定量限为0.1 μg/kg；
适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构等。

专用柱优势：
ProElut DMY 柱由2种吸附剂按照一定的比例分层填装而成，采用不同作用机理去除杂质，同时对二甲基黄和二乙基黄没有不可逆吸附，保证了样品的净化效果及回收率；本产品是商品化的成品柱，不用手工填装，吸附剂稳定性好，不受外界环境因素影响，保证实验结果的重现性和准确性；过柱过程操作步骤简单，节省时间，提高了工作效率
以下为详细解决方案，敬请参考！
腐乳中二甲基黄和二乙基黄的测定
1、适用范围
适用于腐乳中二甲基黄和二乙基黄的检测，二甲基黄的方法检出限是0.03 μg/kg，二乙基黄的方法检出限是0.04 μg/kg，定量限是0.1 μg/kg。
2、提取
取1.0 g样品，加1.0 g氯化钠与5 mL乙腈，涡旋混匀，6000 rpm下离心2 min，精密量取2.5 mL上清液待净化。
3、净化——ProElut DMY 3 mL（Cat#：65914）

a活化：	3 mL乙腈活化；
b上样： c淋洗：	加入待净化液，弃去流出液；加入3 mL乙腈，弃去流出液；
d洗脱：	加入4 mL10%氨水甲醇，收集流出液；
d重新溶解：	将流出液在50 ℃下氮吹至干，用乙腈定容至1 mL，过0.22 μm微孔滤膜，供[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS分析。

4、分析条件
4.1 UPLC 条件：
色谱柱：Endeavorsil C18，100 × 2.1 mm，1.8 μm (Cat.# 87003)
流速：0.2 mL/min
进样量：5 μL
柱温：35 ℃
流动相： A：0.1%甲酸水 B：乙腈
梯度设置

时间/Min.	0	5	5.5	10
A（%）	20	10	20	20
B（%）	80	90	80	80

4.2 质谱条件：

电离模式：ESI	扫描方式：正离子扫描
检测方式：多反应监测	电喷雾电压：5500 V
雾化气压力：50 psi	辅助气压力：50 psi
气帘气压力：20 psi	离子源温度：500 ℃

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

药物名称	定性离子对	定量离子对	碰撞气能量/eV	去簇电压/ V
	（m/z）	（m/z）
	(母离子/子离子)	(母离子/子离子)
二甲基黄	226.2/77.0	226.2/77.0	28	77
	226.2/134.1		28
二乙基黄	254.2/120.2	254.2/120.2	34	73
	254.2/148.1		26
	254.2/134.1		33

5、添加回收结果
腐乳中二甲基黄和二乙基黄的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS检测添加回收结果

分析物	基质	添加水平(μg/kg)	回收率(%)
二甲基黄	黄色腐乳	1.0	95.4
二乙基黄	黄色腐乳	1.0	98.6
二甲基黄	红色腐乳	1.0	90.5
二乙基黄	红色腐乳	1.0	92.3

二甲基黄标准多反应监测色谱图.jpg

二甲基黄标准多反应监测色谱图

二乙基黄标准多反应监测色谱图

添加水平为1.0 μg/kg黄色腐乳中二甲基黄和二乙基黄检测的多反应监测色谱图

黄色腐乳中二甲基黄二二乙基黄检测(空白样品)的多反应监测色谱图

添加水平为1.0 μg/kg红色腐乳中二甲基黄和二乙基黄检测的多反应监测色谱图

红色腐乳中二甲基黄二二乙基黄检测(空白样品)的多反应监测色谱图

腐乳中二甲基黄和二乙基黄的测定相关产品信息：

货号	名称	规格
样品前处理
65914	用于腐乳中二甲基黄、二乙基黄检测 ProElut DMY	3 mL, 50/pk
244358	12管防交叉污染真空SPE萃取装置	12位
4803	1,3,6mL柱管通用连接器	15/pk
4806	考克(控制流量)	15/pk
99011	真空/正压两用泵，无油	1/pk
99013	抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米,2L抽滤瓶及橡胶塞)	1/pk
30039	FitMax针头式过滤器 Nylon	13 mm,0.22 μm 100/pk
30040	FitMax针头式过滤器 Nylon	13 mm,0.45 μm 100/pk
标准品
12-N-12774-100MG	二甲基黄	100 mg
50P-C12604600	二乙基黄	100 mg
色谱柱及保护柱
87003	超高效液相色谱柱 Endeavosil C18	100 × 2.1 mm，1.8 μm
HPLC溶剂Ÿ缓冲盐Ÿ离子对试剂
50101	乙腈 HPLC级	4 L
50102	甲醇 HPLC级	4 L
50144	甲酸 HPLC级	50 mL
通用色谱产品
52401B	瓶架/蓝色（现货）	50孔
52401A	瓶架/白色（现货）	50孔
1034	样品瓶（棕色/螺纹）	2 mL, 100/pk
1035	样品瓶盖/含垫（已经组装）	100/pk
H80465	HPLC 进样针	25 μL