本人是菜鸟,因购买UPLC是另一位同事,她调离,我临时接手。需要测试的是浮游植物色素组成,采用了经典的HPLC方法Zapata(2000)的色素分离的方法,A为甲醇/乙腈/吡啶水溶液(50:25:25,v/v/v);流动相B为甲醇/乙腈/丙酮溶液(20:60:20,v/v/v),梯度洗脱程序:
时间 A% B%
0 100 0
22 50 50
28 20 80
40 5 95
43 5 95
43.1 100 0
45 100 0
使用色谱柱为Waters Symmetry C8色谱柱(3.5 μm,4.6×150 mm),加装 Symmetry C8保护柱。
目前的问题是基线随梯度变化,但是相同的方法在waters hplc上没有这么大的漂移具体见下图:
黑色为hplc出图,红色为uplc出图,请问各位专家,是什么原因?
图中黑色出峰为:Chlorophyll c2,Pheophorbide a,内标,Divinyl Chlorophyll a,Pheophytin-a,b-carotene
红色出峰为:Pheophorbide a,内标,Divinyl Chlorophyll a,Pheophytin-a,b-carotene,叶绿素c2未出峰