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液相色谱（LC）
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主题：【分享】新的色谱柱应该如何使用？？

浏览0 回复6 电梯直达
lijing320323
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发表于：2016/05/10 20:54:28 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

1.使用新鲜洁净的水与乙腈。冲洗系统，确保系统干净，不含任何缓冲盐和污染物。
2.取用色谱柱时避免磕碰掉落。
3.将色谱柱入口端连接到系统上，柱出口端先不要连接，色谱柱身上有箭头标明正确流向。
4.在0.1mL/min流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱，然后在2分钟内将流速升至0.5mL/min。
5.当溶剂均匀的从柱出口端流出，停流速，将色谱柱出口端接到系统检测器上（这样可以避免气泡进入检测系统，并且可快速达到基线平衡）。
6.重启流速，按照步骤4的方法逐渐提高流速，至常规分析时所使用的流速。
7.参考柱效测试报告中的方法，使用该流动相条件平衡色谱柱，通常需要使用5-10倍柱体积的流动相，直至压力与基线稳定。
8.测试柱效。如果没有柱效测试报告中的分析物，请联系厂家部门寻求支持，使用合适的浓度与进样量。柱效结果略低于柱效测试报告属正常情况。如结果明显偏低、峰形拖尾，提示色谱柱和/或所使用的液相系统处于非理想状态，需要进行故障排查。当使用2.1mm内径色谱柱时，建议优化系统以减少谱带展宽，包括：使用检测器微量流通池，减少进样器loop环体积，使用较小内径（如0.005''或0.12mm）的系统管路。并确保管路与色谱柱连接恰当、无死体积。当使用小颗粒填料（如2.5μm）短柱进行高效快速分离时，

需要考虑以下因素：
1.确保管路与色谱柱连接恰当、无死体积，尽量优化系统减少谱带展宽；
2.提高采样频率至10点/秒以上；
3.较小粒径的色谱柱产生的柱压较高，而较小粒径要达到最优色谱效率所需的线速度较高，请根据所用LC系统的实际情况调节流速；
4.可使用较高的柱温来补偿小颗粒造成的压力升高，例如40?C。使用杂化颗粒反相色谱柱时，可使用45?C或更高。
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夏天的雪
bingwang228
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2016/5/11 11:43:21 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
按照这个规则来做应该是做的比较细致了
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支点
zhx_fs_ln
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2016/5/11 15:44:07 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
写的挺详细，应该针对的是反相柱例如C18，有些柱子的清洗条件有些不同，但原则上都是一样的。
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郁金香
cwfang888
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2016/5/13 16:14:07 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
学习了，谢谢！
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长胡子的菩提
v3109824
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2016/8/26 14:01:57 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
确实是仅总结了RP的柱子，NP的柱子没有写，看说明书是万能的
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lijing320323
lijing320323
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2016/8/28 12:02:16 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
色谱柱的使用也是门技术，特别的柱子如正相柱，更要注意
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hujiangtao
hujiangtao
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2016/8/29 9:45:09 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
非常好的新柱使用方法
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