主题:【求助】SEC色谱柱柱效检查所用试剂如何选择

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blueskybe
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原文由 tianru的爸爸(lxdongzi2003) 发表:
如果计算柱效应该是用:对氨基苯甲酸。
如果要看分离度,以及各区段蛋白的对称性,就要用多个蛋白的混合物,最好用说明书~检测报告中的样品~混合物,包括蛋白和对氨基苯甲酸。
如果用白蛋白测定柱效,除非你测定的蛋白也是白蛋白,否则就没有必要了。无论是看柱效,还是分离度,或者对称性,乃至重复性。因为对你的检测指导意义不大。
最好用说明书的方法,或者用你的检测物质去计算,无论是柱效,还是其它指标。
白蛋白的凝胶纯度,正常应该是有多个分子量的,不仅有二聚体,还有三聚体,以及多聚体,只要上样量足够了,你就能看到。
好早呀!谢谢!
夏天的雪
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原文由 blueskybe(blueskybe) 发表:
用说明书里的试剂,那流动相是不是也应该用说明书里的?但受限于QC、GMP(我们是QC实验室),在这个检验项目里,需要同时完成柱效和样品的检验,用到的流动相只能根据样品来定,不知道选说明书里的试剂,却不用其对应的流动相适不适用?
如果要用说明书里的物质进行柱效测定,选用的流动相也最好一致,否则测定的结果也会出现偏差
夏天的雪
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原文由 blueskybe(blueskybe) 发表:
说明书中用了五种物质量(甲状腺球蛋白、γ-球蛋白、卵清蛋白核糖核酸酶A、对氨基苯甲酸),但最后以对氨基苯甲酸来计算的塔板数。我们是每做一次检验都要进行柱效检查的,基于当初方法开发时用的BSA做柱效,所以一直都用它来做。现在我们想换一种更纯点的物质来做,但不知道在选择柱效检查的试剂时有没有要遵循一定的原则?希望能给予指点。谢谢呀!
柱效检查最好选择稳定的,方法简单的,而且不能有干扰,待测物质的保留性能也要好,不能有拖尾、峰分叉等现象,测定柱效单一组分就行,
月旭-李良翔
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前面的小峰应该是BSA的聚体,你第一次用的什么测柱效的话后面最好保持一致。
blueskybe
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原文由 月旭-李良翔(v2761256) 发表:
前面的小峰应该是BSA的聚体,你第一次用的什么测柱效的话后面最好保持一致。
BSA主峰前面是有几个聚合体小峰,但出现的情况是同一BSA,最前面的一个小峰在同一次实验里表现出开始没有或很小,然后慢慢变大,这是为什么呀?但在多数情况下最前面峰是稳定在一定面积内不变的。把主峰前面所有的聚合体小峰做为整体统计了下,聚合体一般是稳定在1700~1800,主峰面积基本都5900。而在最前面的第一个小峰没有或很小时表现出的所有聚合体面积只有1400左右,主峰面积仍是5900。这样的状况是系统有问题还是柱子有问题?我们用了3到4根柱子,都表现出了这样的情况。
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