主题：【第九届原创】面积归一化法的准确性

    液相色谱常规分析中，面积归一化法是经常用到的，往往采用这个方法来确定样品的含量。但是由于操作细节的不同，有时不同人做出来会出现很大的差异，即使用相同的方法，下面就是一个具体的实例。
    样品名称：2- 氯-5-三氟甲基吡啶
    我们根据我们的习惯和特点，很快分析完这个样品，结果表明样品纯度很高，含量为99.2%（图1），不过在测定前客户要求我们时间放到20分钟，但没仔细体会其含义。等测定结果出来后，客户对我们说，与工厂的测定结果不符，别人是92.2%，为什么差距这么大。这个差距当然很大了，不过由于不同人做，采用条件不同，有时的确有这么大的差异，我仔细审查了学生做的结果，认为我们的结论是真确的，因为我们用DAD比较了不同波长下的结果的差异，并没有这么明显。为了弄清原因，要求客户提供色谱图和色谱条件，但工厂开始只给了色谱图（图2），并没有具体的色谱条件，色谱条件一般作为技术保密，不容易公开。


    比较这2个图，大家发现了什么，我们是采用戴安的U3000，用原装软件记录。而厂家的记录软件是最常见的国产数据工作站 N2000。仔细比较这二个图，如果细心就会发现，工厂用N2000记录的色谱图是平头峰，而我们仍保持尖峰。问题就出在这里，当样品信号超过仪器记录时，出现平头峰，使得主峰实际记录面积变小，而杂质峰面积变大。N2000的最大记录为1000mV，而一般进口软件在3000mV以上才会超载。工厂的分析者，按照某一方法，不考虑记录软件的差异，结果使得检测信号非常高，这是一方面。从另一方面我们选择的是另一个最大检测波长265nm，而不是工厂的选择的最大波长215nm，在215nm样品峰更高，更会超载。
  在这里，不同色谱柱的差异，以及流动性相一般情况下的差异，不会造成不同检测者测定结果的差异太大。检测波长的选择是一个重要的方面，不同的波长有时差别很大，215nm和265nm条件下，杂质的含量差异是比较大的，但对主峰的相对面积影响不大。不过很多人对样品信号的超载往往会忽视，尤其有些人对不同仪器软件的差异不熟，一味地照搬照抄。给用户造成了很大的困惑。具体操作者应根据不同的仪器状况作出方法的具体调整。
    因此，如果不同人对同一样品做出来结果差异很大，不一定说明某人正确，某人不正确。需要比较很多因素，分析判断，才能得出相对合理的结论。当然，这种面积归一化法的结论事相对的，不是绝对的。
    面积归一化法的可靠性是相对的，但在合理的条件下，这种可靠性又是可信的，需要分析者自己去把握。