4. 导数分光光度计法
采用不同的实验方法可以获得各种导数光谱曲线.不同的实验方法包括双波长法,电子微分法和数值微分法.
将对波长λ求导:
在整个波长范围内可控制在恒定值,则
上式表明,第一,导数分光光度法的一阶导数信号与浓度成正比例,不需要通过对数转换为吸光度;第二,测定灵敏度决定于摩尔吸光系数在特定波长处的变化率 ,在吸收曲线的拐点波长处最大,灵敏度最高.如图 所示.
对于二阶导数光谱:
只有当一阶导数时,二阶导数信号才与浓度成正比例.测定波长选择在吸收峰处,其曲率最大,灵敏度就高.
三阶导数光谱:
当一阶导数时,三阶导数信号与浓度成比例,测定波长在曲率半径小的肩峰处最大,可获得高的灵敏度.
在一定条件下,导数信号与被测组分的浓度成比例.测量导数光谱曲线的峰值方法有基线法,峰谷法,如图13.24所示.
基线法又称切线法在相邻两峰的极大或极小处画一公切线,在由峰谷引一条平行于纵坐标的直线相交于a点,然后测量距离他t的大小的.
峰谷法测量相邻两峰的极大和极小之间的距离p,这是较常用的方法.
峰零法测量峰至基线的垂直距离z.该法只适用与导数光谱曲线对称于横坐标的高阶导数光谱.
导数分光光度法对吸收强度随波长的变化非常敏感,灵敏度高.对重叠谱带及平坦谱带的分辩率高,噪声低.导数分光光度法对痕量分析,稀土元素,药物,氨基酸,蛋白质的测定,以及废气或空气中污染气体的测定非常有用.