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主题：【求助】HPLC检测谷氨酸，购买的标准品出峰良好，自己配制的不出峰，求指点~谢谢

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JokerCola
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发表于：2018/03/23 11:38:01 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
主诉：HPLC检测谷氨酸，跑购买的A家mix标准品，出峰情况良好，可是用我自己配制的谷氨酸单标溶液，就什么都没有了。
设备：A家 HPLC 1100，FLD 1200
柱子：Agilent Ecllpse AAA（4.6 mm×150 mm，5μm）
流动相：A：40 mmol/L磷酸二氢钠溶液（10 mmol/L NaOH调节PH至7.8）；
              B：乙腈:甲醇:水=45:45:10。
衍生剂：A家成品，磷酸缓冲液，OPA，FMOC
标准品：1、A家购买的成品15种(?)mix；2、实验室自行配制的谷氨酸溶液
            注：实验室配制谷氨酸溶液的方法
                  谷氨酸粉末，Sigma的【95436-100mg L-Glutamic acid certified reference material, TraceCERT】
                  取上述粉末，用1 M的HCl配制成10 μmol/mL储备液，再用0.1 M的HCl配制成 5nmol/mL的使用液。
                  使用的时候用0.1 M的HCl稀释成所需梯度使用。

麻烦各位老师帮帮忙看看问题出在什么地方，是我的标准品配制方法不对么？
没做过氨基酸的粉末配制，由于牵扯后面的衍生试验，是不是有什么需要注意的地方，或者需要特别添加的地方呢？
谢谢各位老师！~~
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夏天的雪
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2018/3/26 16:34:22 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可能是配制的试剂不对，影响了后面的衍生。混标是用什么试剂配置的，可以参考一下
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moviehua
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2018/3/27 9:35:59 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
说明配置过程中出现的问题。
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JokerCola
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2018/3/27 10:13:22 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:
可能是配制的试剂不对，影响了后面的衍生。混标是用什么试剂配置的，可以参考一下


您好，昨天我又重新配制了标准品，这次是最一开始的10μmol/mL就用0.1 M HCl来配置，包括后面稀释都是。
结果是，稀释成为200pmol/mL和1000pmol/mL的时候还是没有峰检出，于是我索性用10μmol/mL的液体直接上机，结果就出峰了，而且峰形很好。
我就搞不明白了，为什么agilent的10pmol/mL和100pmol/mL的混标出的就很好看，我们自己配置的就出不了这么低的浓度呢？
μmol和pmol也是差了10的6次方对吧？
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JokerCola
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2018/3/27 10:14:11 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 moviehua(moviehua) 发表:
说明配置过程中出现的问题。
  您好，昨天我又重新配制了标准品，这次是最一开始的10μmol/mL就用0.1 M HCl来配置，包括后面稀释都是。
结果是，稀释成为200pmol/mL和1000pmol/mL的时候还是没有峰检出，于是我索性用10μmol/mL的液体直接上机，结果就出峰了，而且峰形很好。
我就搞不明白了，为什么agilent的10pmol/mL和100pmol/mL的混标出的就很好看，我们自己配置的就出不了这么低的浓度呢？
μmol和pmol也是差了10的6次方对吧？
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moviehua
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2018/3/27 10:34:54 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
那你有没有对比购买的混标和你配置的10umol的峰面积差了多少？
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hujiangtao
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2018/3/27 13:44:51 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
氨基酸受pH值影响很大
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夏天的雪
bingwang228
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2018/3/31 21:11:43 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 JokerCola(v2669685) 发表:
您好，昨天我又重新配制了标准品，这次是最一开始的10μmol/mL就用0.1 M HCl来配置，包括后面稀释都是。
结果是，稀释成为200pmol/mL和1000pmol/mL的时候还是没有峰检出，于是我索性用10μmol/mL的液体直接上机，结果就出峰了，而且峰形很好。
我就搞不明白了，为什么agilent的10pmol/mL和100pmol/mL的混标出的就很好看，我们自己配置的就出不了这么低的浓度呢？
μmol和pmol也是差了10的6次方对吧？
直接进样，不衍生吗？出的峰确定就是谷氨酸的峰？10μmol/mL的出峰和混标的出峰时间一致吗？
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