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巧用比浊仪协助判定试管凝集试验结果
1背景介绍
布鲁氏菌病(简称布病)是由布鲁氏菌属细菌致人畜共患的传染病,世界范围性威胁人类健康和影响畜牧业发展,其临床特征是雌性流产、乳腺炎、不育和各种组织(如睾丸、关节)的炎症。世界动物卫生组织(OIE)将布病列为B类重要传染病,中华人民共和国传染病防治法将布病列为乙类传染病。
为筛查和及时确认动物是否感染布病,每年农业部门要对易感动物(如奶牛、羊)进行定期监测,常用的方法为试管凝集试验。具体做法是:将血清按一定比例进行倍比稀释,加入抗原置于37℃温箱中反应24h,取出检查并记录结果。
每次实验需配制比浊管,作为反应程度的判定依据。因抗原为白色的混悬液,按不同比例稀释后呈现不同的混浊程度,故可以作为判定反应程度的依据。比浊管配制方法如下:
管号 | 抗原 | 稀释液 | 清亮度% | 记录标记 |
1 | 0.00 | 1.00 | 100 | ++++ |
2 | 0.25 | 0.75 | 75 | +++ |
3 | 0.50 | 0.50 | 50 | ++ |
4 | 0.75 | 0.25 | 25 | + |
5 | 1.00 | 0.00 | 0 | - |
2试管凝集试验存在的问题
按照标准要求,样品的反应程度(即浊度)的判定采用目视法。该法在不同实验人员之间存在很大的不确定性,容易引起误判。
3改进
实验室有一台生物梅里埃公司生产的DENSIMAT电子比浊仪,原用于测定细菌悬浊液麦氏单位。因试管凝集试验结果判定中,只是将样品管与5支比浊管进行浊度比较,并不涉及浊度的实际数值,故尝试利用比浊仪协助判定试验结果。方法如下:
3.1测试比浊管浊度
逐一将比浊管插入比浊仪中,读取浊度值。经反复测试,读数均非常稳定,一般多次测定中只是偶尔会出现0.1个单位的偏差,故采用多次测定取出现次数最多的读数为准。实测值如下:
比浊管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
浊度值 | 0.1 | 0.6 | 1.2 | 1.6 | 1.8 |
记录标记 | ++++ | +++ | ++ | + | - |
3.2测试样品管浊度
逐一将样品管插入比浊仪中,读取浊度值,并进行反应程度的标记。因样品管浊度值与比浊管浊度值不完全一致,采用取各比浊管间平均值后进行判定,具体如下:
浊度值 | < 0.35 | 0.35~0.9 | 0.9~1.4 | 1.4~1.7 | >1.7 |
记录标记 | ++++ | +++ | ++ | + | - |
本次实验共检测样品5份,每份样品4个稀释度,实测值及判定如下:
样品号 | 1:25 | 1:50 | 1:100 | 1:200 | 效价判定 |
浊度值 | 标记 | 浊度值 | 标记 | 浊度值 | 标记 | 浊度值 | 标记 |
1 | 0.4 | +++ | 0.4 | +++ | 0.3 | ++++ | 0.2 | ++++ | ≥1:200 |
2 | 0.2 | ++++ | 0.1 | ++++ | 0.4 | +++ | 1.5 | + | 1:100 |
3 | 1.9 | - | 1.8 | - | 2.1 | - | 1.9 | - | <1:25 |
4 | 0.1 | ++++ | 0.1 | ++++ | 0.3 | ++++ | 1.5 | + | 1:100 |
5 | 0.1 | ++++ | 0.2 | ++++ | 0.4 | +++ | 1.3 | ++ | ≥1:200 |
6 | 0.3 | ++++ | 0.3 | ++++ | 0.2 | ++++ | 0.2 | ++++ | ≥1:200 |
4小结
利用比浊仪协助进行试管凝集试验结果的判定,可以消除不同实验人员之间的主观性,将结果予以数字化,提高结果判定的可靠性,值得引入试管凝集试验中对结果进行判定。