色谱柱的清洗和再生反压升高、保留时间改变、柱效下降,这些表征现象都在提示柱床内或者移动相表层有
沉积物存在。大多数时候,可以按照正确的清洗步骤来处理解决以上问题。值得注意的是,
在大多数情况下越早动手清洗(再生)效果越好。
强吸附性物质总是会停留在色谱柱的溶剂导入端,许多情况下反向冲洗会有助于色谱柱
的清洗。值得指出的是,装填效果好的色谱柱是不会因为逆流操作而降低性能的。
在反相色谱中沉积物通常会以填料床表面吸附物或沉淀的形式存在。对于不同类型的杂
质可采用的冲洗溶剂详见下表:
*作为最后的选择,使用量不超过 10 倍柱体积,操作最后用乙醇/1%水性乙酸(50: 50)酸
化固定相填料。
再生操作步骤:
1. 针对杂质选择合适的溶剂/溶剂混合比。在杂质成分未知时,权当强极性/离子物质情况
处理以防止沉淀的进一步产生。
2. 降低移动相流速(正常流速的 10%),尽可能用反相工作模式并略微提高一点工作温度
(<40℃),冲洗量上限为 10 倍柱体积。
3. 反压出现异常时,选择在常用流速下频繁查看反压的变化情况。
4. 如果问题没有好转,使用针对带正电荷极性和/或大分子沉积物的冲洗条件。如果使用十
二烷基磺酸钠作为冲洗液,事后需用纯四氢呋喃,二甲基甲酰胺或者乙腈对色谱柱做彻
底冲洗。
5. 如果问题顽固存在。请联系我方技术支持寻求进一步帮助。
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