主题：【求助】衍生化试剂？

原文由 larkin_cheng 发表:
今天看文献，不知道衍生化试剂有什么作用，衍生化反应、衍生化处理的作用，希望哪位能给解答一下，不胜感激！

衍生化试剂很多,简单的说:它能帮你将不能分析的样品通过衍生化试剂反应转化为可分析的化合物.衍生化试剂比如有:烷基化试剂、硅烷化试剂、酰化试剂类、荧光衍生化试剂、 紫外衍生化试剂 、苯甲酰氯为衍生化试剂、羟基衍生化试剂 、 手性衍生化试剂、氨基衍生化试剂、气相色谱和液相色谱中常用的柱前衍生化方法、、固相化学衍生化法.高效液相色谱法有甲醛与2，4－二硝基苯肼（DNPH）反应生成腙，衍生化产物醛腙用有机溶剂萃取富集后，在一定温度下蒸发、浓缩，再以甲醇或乙腈溶解或稀释，最后进行色谱测定。

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原文由 guojtjt 发表:

原文由 larkin_cheng 发表:
今天看文献，不知道衍生化试剂有什么作用，衍生化反应、衍生化处理的作用，希望哪位能给解答一下，不胜感激！

衍生化试剂很多,简单的说:它能帮你将不能分析的样品通过衍生化试剂反应转化为可分析的化合物.衍生化试剂比如有:烷基化试剂、硅烷化试剂、酰化试剂类、荧光衍生化试剂、 紫外衍生化试剂 、苯甲酰氯为衍生化试剂、羟基衍生化试剂 、 手性衍生化试剂、氨基衍生化试剂、气相色谱和液相色谱中常用的柱前衍生化方法、、固相化学衍生化法.高效液相色谱法有甲醛与2，4－二硝基苯肼（DNPH）反应生成腙，衍生化产物醛腙用有机溶剂萃取富集后，在一定温度下蒸发、浓缩，再以甲醇或乙腈溶解或稀释，最后进行色谱测定。

  长点见识了，恳请guojtjt大侠传点有关衍生化试剂的选择以及具体操作的资料上来！不胜感激！

衍生化

使用色谱分离原理检测化学成分，当被检测目标成分的理化性质（如沸点、极性、吸光性）不便分离检测时，经常采用衍生化技术，改变其理化性状，达到可以使用色谱仪检测的目的。

化学衍生法指借助化学反应将待测组份接上某种特定基团，从而改善其检测灵敏度和分离效果的方法。利用化学衍生反应达到改变化合物特性的目的，使其更适合于特定分析的过程，在仪器分析中被广泛应用。气相色谱中应用化学衍生反应是为了增加样品的挥发度或提高检测灵敏度，而高效液相色谱的化学衍生法是指在一定条件下利用某种试剂(通称化学衍生试剂或标记试剂)与样品组份进行化学反应，反应的产物有利于色谱检测或分离。一般化学衍生法主要有以下几个目的：提高样品检测的灵敏度；改善样品混合物的分离度；适合于进一步做结构鉴定，如质谱、红外或核磁共振等。进行化学衍生反应应该满足如下要求：对反应条件要求不苛刻，且能迅速、定量地进行；对样品中的某个组份只生成一种衍生物，反应副产物及过量的衍生试剂不于扰被测样品的分离和检测；化学衍生试剂方便易得，通用性好[37]。

衍生化常用的反应有酯化、酰化、烷基化、硅烷化、硼烷化、环化和离子化等。虽然气相色谱已有许多衍生化方法，但它有一个致命的缺点是不能用于热不稳定化合物。此外，对于一些有复杂基质的实际样品，除分离上的困难外，还容易污染进样器和损坏柱子。

衍生化反应从是否形成共价键来说，可分为两种：标记和非标记反应。标记反应是在反应过程中，被分析物与标记试剂之间生成共价键；所有其它类型的反应，如形成离子对、光解、氧化还原、电化学反应等都是非标记反应。另一种区分衍生化反应是从衍生反应的场所来分，有柱前衍生化(pre-columnderivatization)，柱上衍生化(on-columnderivatization)和柱后衍生化(post-columnderivatization)三种。从是否与仪器联机的角度来分有：在线(on-line)、离线(off-1ine)和旁线(at-line)(自动化)三种。目前在HPLC中以离线的柱前衍生法(简称柱前衍生法)与在线的柱后衍生法(简称柱后衍生法)使用居多，旁线衍生化方法是发展方向。   

柱前衍生法和柱后衍生法各有其优缺点。柱前衍生法的优点是：相对自由地选择反应条件；不存在反应动力学的限制；衍生化的副产物可进行预处理以降低或消除其干扰；容易允许多步反应的进行；有较多的衍生化试剂可选择；不需要复杂的仪器设备。缺点是：形成的副产物可能对色谱分离造成较大困难；在衍生化过程中，容易引入杂质或干扰峰，或使样品损失。柱后衍生法的优点有：（1）形成副产物不重要，反应不需要完全，产物也不需要高的稳定性，只需要有好的重复性即可；（2）被分析物可以在其原有的形式下进行分离，容易选用已有的分析方法。缺点是：（1）对于一定的溶剂和有限的反应时间来说，目前只有有限的反应可供选择；（2）需要额外的设备，反应器可造成峰展宽，降低分辨率。

应用实例。（1）硅烷化柱前衍生气相色谱法测定氯霉素残留：样品经提取，浓缩净化、微氮吹干后，加入100μL硅烷化试剂，经60℃30min反应。氯霉素的沸点降至可供气相色谱或气质联用仪分析用。采用DB-35MS（30m×0.25mm×0.25µm）色谱柱。（2）氧化铅后柱衍生—HPLC法测定孔雀石绿残留：孔雀石绿（malachite green，MG）属于三苯甲烷类染料。无色的母体形式（leuco malachite green，LMG）是孔雀石绿在鱼体及其他生物体内的主要代谢产物和存在形式，在检测孔雀石绿在鱼体内的残留，应同时检测MG与LMG。采用C18柱色谱柱（250×4.6mm I.D.，5μm）和Celite 545氧化铅后柱（纯PbO2（1：1），20mm×2.1mm I.D）。结果在MG、LMG与结晶紫（GV）、母体结晶紫同时检测时，保留时间分别为：MG 8.33min、GV 14.18min、LMG 18.19min和19.84min。使用氧化铅后柱衍生—HPLC法测定孔雀石绿残留，具有分离效率高、快速、重现性好、仪器设备简单等优点，是MG、LMG检测中最常用的方法。

虽然已有许多的衍生化试剂被使用，但是目前开发新的衍生化试剂仍然是一个活跃的研究领域，其主要目的是不断提高灵敏度和选择性以及扩大应用范围。

在GC－MS方法分析样品时，对羟基、胺基、羧基等官能团进行衍生化有十分重要的作用，主要表现在：
1、改善样品的气相色谱性质。如羟基、羧基等气相色谱特性不好。
2、改善样品的热稳定性。
3、改善样品的分子质量。分子量增大，有利于样品与基质的分离。
4、改善样品的质谱行为。
5、引入卤素或吸电子基团，是样品可用CI检测，提高灵敏度。
6、分离手性化合物。

GC-MS方法中常用的衍生化方法
1、硅烷化(silylation)
2、酰化(acylation)
3、烷基化(alkylation)

判断衍生化反应的指标
1、反应是否迅速、定量进行，反应重复性好坏，反应条件是否温和，是否容易操作。
2、反应选择性高，最好只于目标化合物反应。
3、衍生化产物只有一种，反应的副产物和过量的衍生化试剂应不干扰目标化合物的分离和检测。
4、衍生化试剂通用性好，价廉易得。

衍生化方法应用不当的弊端
1、柱上衍生化可能损伤色谱柱。
2、某些衍生化试剂需氮气吹干。
3、衍生化不完全，影响灵敏度。
4、衍生化试剂不当，产物分子量过大。

总之，GC－MS检测中选用衍生化试剂时，除了和气相色谱法相同的准则外，还应注意衍生物的质谱特性：质量碎片特征性强，分子量适中，适合质量型检测器检测，有利于与基质干扰物的分离。

硅烷化衍生化方法是气相色谱样品处理中应用最多的方法，它是利用质子性化合物（如醇、酚、酸、胺、硫醇等）与硅烷化试剂反应，形成挥发性的硅烷化衍生物。

常用的硅烷化试剂

硅烷化试剂中的烷基硅烷基和反应物中的羟基或胺基上的氢发生交换，形成烷基硅烷基产物。常用的硅烷化试剂有：
1、N，O－双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）和N，O－双三甲基硅基乙酰胺（BTA）：能衍生化胺基和羟基。常用于体内药物及其代谢物的检测。
2、N－甲基叔丁基二甲基硅基三氟乙酰胺（MTBSTFA）：常用于药物、类固醇的检测。由于叔丁基二甲基硅基有较大的空间效应，有些胺基较难衍生化。在质谱检测中，该衍生物很容易失去叔丁基形成较强的(M-57)+离子，有利于作为MS-MS的母离子。
3、N－甲基三甲基硅基三氟乙酰胺（MSTFA）：最常用的硅烷化试剂之一。衍生化也是引入三甲基硅基。

硅烷化的技术要点

常用的硅烷化试剂的一般衍生化条件：
在吹干的提取物残渣中加入100µl的MSTFA或BSTFA，加入50 µl的吡啶或乙腈，或用事先配好的衍生化试剂中加催化剂（三甲基碘硅烷TMSI或三甲基氯硅烷TMSCI）和抗氧剂（硫代赤藓糖醇）。衍生化小瓶加盖后在60oC衍生化5～30min，或微波衍生化2～3min，视不同化合物而定。残渣吹干水分对衍生化十分关键。因为衍生化试剂MSTFA和BSTFA遇水立即分解。