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主题：【已应助】液相色谱应用若干问题

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huangwenwei
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发表于：2019/11/28 13:49:14 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
本人今年刚研一，老板让自己开始新的课题。要用液相色谱，有几个问题不太明白：我看文献中用得色谱柱是Luna C18柱150*4.6mm，我看了一下我们实验室的色谱柱为BDS  HYPERSI C18 250*4.6mm我想问问用这柱子代替文献上的结果会差很多吗？因为我觉得就是柱子长了，可能时间久点而已。还有如果柱子的规格一样品牌不一样应该影响不大吧？还有就是文献中用的是双流动相洗脱含0.15%（v/v）乙酸的色谱级纯净水（溶剂A）和乙腈（溶剂B），洗脱方式是“最初为8%溶剂B，10min内梯度上升至40%，然后2min后梯度升为48%，最后1min上升到60%，并继续维持5min至基线平衡。”我想问问的是如果用的是双流动相洗脱那洗脱是溶液A是怎么变化的呢？因为本人是新人之前没用过液相，所以拜托各位了。
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junxi2008
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2019/11/28 13:56:52 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱子长了，保留时间也会相对延长。
流动相A为含0.15%乙酸的水，B为纯色谱级乙腈，洗脱方式是梯度洗脱，即刚开始0min是92%A+8%B，10min内升至为60%A+40%B，12min升至52%A+48%B,13min时为40%A+60%B，之后维持5min，梯度如下：
      时间（min)    A(%)      B(%)
        0          92          8
        10          60          40
        10~12        52          48
        12~13        40          60
        13~18        40          60
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