主题:【已应助】牛初乳中igG含量测定

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张婷婷
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用国标测定牛初乳中igg含量,出现很多问题,希望有经验的前辈给与指导!    1  空针在保留时间出峰,认为igg与柱子结合没洗脱干净,一直走空针峰面积会变小,但是一直走空针流动相都是盐可能对柱子不好,如何解决?如何更好的洗柱子?2  浓度达到0.54mg/ml出峰后基线回不到零点,上飘,浓度高的没有这种情况,但是基线不回到零点影响积分和后续实验,如何解决?图1是空针  图2是色谱图
最佳答案:轶辰回复于2020/10/26
1  空针在保留时间出峰,认为igg与柱子结合没洗脱干净,一直走空针峰面积会变小,但是一直走空针流动相都是盐可能对柱子不好,如何解决?如何更好的洗柱子?
走完序列后走空针清洗流动相,流动相是盐,柱子使用完,用先用高水相冲洗,清洗整个系统的盐,然后用高有机相冲洗。
2  浓度达到0.54mg/ml出峰后基线回不到零点,上飘,浓度高的没有这种情况,但是基线不回到零点影响积分和后续实验。
这个低浓度基线回不到零点,个人觉得是仪器方法的原因或者仪器状态的原因。可以尝试优化下方法
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轶辰
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1  空针在保留时间出峰,认为igg与柱子结合没洗脱干净,一直走空针峰面积会变小,但是一直走空针流动相都是盐可能对柱子不好,如何解决?如何更好的洗柱子?
走完序列后走空针清洗流动相,流动相是盐,柱子使用完,用先用高水相冲洗,清洗整个系统的盐,然后用高有机相冲洗。
2  浓度达到0.54mg/ml出峰后基线回不到零点,上飘,浓度高的没有这种情况,但是基线不回到零点影响积分和后续实验。
这个低浓度基线回不到零点,个人觉得是仪器方法的原因或者仪器状态的原因。可以尝试优化下方法
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原文由 轶辰(m3191395) 发表: 1    空针在保留时间出峰,认为igg与柱子结合没洗脱干净,一直走空针峰面积会变小,但是一直走空针流动相都是盐可能对柱子不好,如何解决?如何更好的洗柱子?走完序列后走空针清洗流动相,流动相是盐,柱子使用完,用先用高水相冲洗,清洗整个系统的盐,然后用高有机相冲洗。2    浓度达到0.54mg/ml出峰后基线回不到零点,上飘,浓度高的没有这种情况,但是基线不回到零点影响积分和后续实验。这个低浓度基线回不到零点,个人觉得是仪器方法的原因或者仪器状态的原因。可以尝试优化下方法
进样完会用水冲,然后用20%甲醇冲,因为柱子保存条件就是20%有机相不敢用更高比例,试了更改流动相ph,流速,柱温,进样量,都无法解决出峰后基线回不到零点的问题