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主题：【求助】紫外吸收检测器的问题

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bnmfghjk
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发表于：2011/07/14 21:34:36 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
前两天做色谱，使用了甲醇与水配比的流动相。期间尝试地调了不同的波长，发现基线（整体）会上下浮，平衡还是平衡的。我从300nm到700nm选取了4-5个波长段，发现基线浮动从差距有50-300mAu，按理说300-700的波长已经超过流动相的截止波长了，吸光度是不是应该不变了？这个是杂散光的影响？还是反射率的原因？求指教
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2011/7/15 8:51:10 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不同波长当然会有不同的影响的！
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zhetengwang
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2011/7/15 10:51:09 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

　　不同波长当然吸收会不一样。怎么可能会调波长以后不变呢？

　　只要基线平了就行了。

　　做液相还太少啊，看来。
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bnmfghjk
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2011/7/15 18:05:57 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
但是300到700的波长超过了截止波长，不是不吸收的么？
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2011/7/15 18:07:42 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zhetengwang(zhetengwang) 发表:

　　不同波长当然吸收会不一样。怎么可能会调波长以后不变呢？

　　只要基线平了就行了。

　　做液相还太少啊，看来。

我的意思是，300到700的波长，已经超过了甲醇跟水的截止吸收限，按理来讲，不是应该全通过的么？那也就不存在吸收不吸收的问题了
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2011/7/15 18:14:12 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zhaohua8011(zhaohua8011) 发表:
不同波长当然会有不同的影响的！

我试过，在紫外分光光度计下检测，用干净的石英皿装纯水测吸光度，在300到700的范围内，测出的吸光度数值几乎一样的。原因就是300到700的波长不被水吸收，超过截止限的光线，是不是应该不会造成这么大的浮动，这是才是我想问的问题。。
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2011/7/15 20:43:44 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
液相紫外检测器原理跟紫外分光光度计是不一样的。

　　紫外检测器有参比池和样品池。紫外分光是静态的比色皿。这里是动态的流通池。
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2011/7/15 22:21:59 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zhetengwang(zhetengwang) 发表:
液相紫外检测器原理跟紫外分光光度计是不一样的。

　　紫外检测器有参比池和样品池。紫外分光是静态的比色皿。这里是动态的流通池。

我觉得你还是没有给我解释清楚老大，就算紫外检测器有参比池跟样品池，流通池是动态流通池，如果所选的波长是不被吸收的波长，这些因素怎么影响到？我只是很好奇，无意冒犯
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2011/7/15 23:17:50 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 bnmfghjk(bnmfghjk) 发表:
原文由 zhetengwang(zhetengwang) 发表:
液相紫外检测器原理跟紫外分光光度计是不一样的。

　　紫外检测器有参比池和样品池。紫外分光是静态的比色皿。这里是动态的流通池。

我觉得你还是没有给我解释清楚老大，就算紫外检测器有参比池跟样品池，流通池是动态流通池，如果所选的波长是不被吸收的波长，这些因素怎么影响到？我只是很好奇，无意冒犯


改变波长，吸光度是一定会变的。

这里的吸光度跟你那紫外分光光度计不能比。这里的流通池才几ul，当然比你那几毫升的比色皿敏感多了。

不要说几百个波长，就是改变几个波长就会有变化。
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有水有渝
xky0230699
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2011/7/16 14:03:30 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 bnmfghjk(bnmfghjk) 发表:
前两天做色谱，使用了甲醇与水配比的流动相。期间尝试地调了不同的波长，发现基线（整体）会上下浮，平衡还是平衡的。我从300nm到700nm选取了4-5个波长段，发现基线浮动从差距有50-300mAu，按理说300-700的波长已经超过流动相的截止波长了，吸光度是不是应该不变了？这个是杂散光的影响？还是反射率的原因？求指教


背景完全不吸收是不可能的，50-300mAu的变化说的是漂移吗，如果是漂移那可能是色谱柱有污染，并不一定是改变波长引起的；平衡还是平衡的。不知道你的基线噪音有多大，压力稳定性如何？
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2011/7/16 17:54:22 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
原文由 bnmfghjk(bnmfghjk) 发表:
前两天做色谱，使用了甲醇与水配比的流动相。期间尝试地调了不同的波长，发现基线（整体）会上下浮，平衡还是平衡的。我从300nm到700nm选取了4-5个波长段，发现基线浮动从差距有50-300mAu，按理说300-700的波长已经超过流动相的截止波长了，吸光度是不是应该不变了？这个是杂散光的影响？还是反射率的原因？求指教


背景完全不吸收是不可能的，50-300mAu的变化说的是漂移吗，如果是漂移那可能是色谱柱有污染，并不一定是改变波长引起的；平衡还是平衡的。不知道你的基线噪音有多大，压力稳定性如何？

恩，50-300mAu的变化是这样：改变波长后，基线往上跳跃300mAu，然后继续走直线，如果继续改变波长，基线又会马上跳动不同的值，不改变波长的情况下，基线走得蛮稳定的。至于基线噪音跟压力稳定性，该怎么提供数据，您能解释下么？
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