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液相色谱（LC）
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主题：【讨论】请问对于反相色谱来说，增加流动相中水的比例，一定可以增加分离度吗？

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风风
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发表于：2012/04/05 21:12:02 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
RT，对于使用C18柱的反相色谱应用，如果使用水+乙腈作为流动相，在满足色谱峰峰形的情况下，适当增加水的比例（例如水由40%增加到50%），一定会增加不同物质在色谱柱上的分离度吗？
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2012/4/6 8:26:54 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
反相体系里增加水相的比例主要作用延长分离时间，这对于很多情况里是可以稍微提高分离效果的，一般也不会太明显，对于有些样品，增加水相甚至会造成样品溶解性下降在柱子里拖尾，更有至于不出峰。所以提高分离度一般是考虑改变流动相体系里的缓冲盐以及柱子
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有水有渝
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2012/4/6 11:25:53 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在反相色谱中，降低有机相比例是一个常用提高分离度的方法，但凡事没有绝对，实践中大部分是这样，不过有些性质过于相似的物质仅通过改变一个因素很难达到完全分离，可以通过多因素优化。
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kevinchan
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2012/4/6 12:46:24 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
多谢2位！我试了一下把水的比例提高10%，原来没有分开的峰确实分开了，只是峰变宽了，高度降低了，面积也减小了一些。越往后，峰越宽，再后面就是馒头了。
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sungw
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2012/4/6 15:53:02 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
降低有机相比例 自然会导致k'增加  峰展宽严重 柱效下降 灵敏度降低
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有水有渝
xky0230699
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2012/4/6 16:23:58 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 风风(kevinchan) 发表:
多谢2位！我试了一下把水的比例提高10%，原来没有分开的峰确实分开了，只是峰变宽了，高度降低了，面积也减小了一些。越往后，峰越宽，再后面就是馒头了。


如果分离度达到要求，也不一定要增加那么多的水，如果组分较多，还可以使用梯度洗脱。
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