主题：【求助】请问各位大侠，能否推荐分析聚丙烯酰胺分子量分布的检测方法

原文由 viscotektegent(viscotektegent) 发表:
场流仪分析PAM应该是最成熟的方法了，至今已经有三、四十年了吧。场流仪最初的应用就是为了分析PAM这种GPC很不好分离的样品的分子量分布，postnova的早期产品F-1000型的最初用户有不少是做PAM分析的，后来才逐渐发展到其他应用领域。
与光散射联机使用的技术也是成熟的技术了。
确实，场流仪价格贵一些，但是分离能力强很多，也还算值得，何况还可以与HPLC/GPC并联使用，以及馏分收集模块等等组成“发烧友”型的分离工具。此外，除了常用的流动场分离，还有热场、离心场、重力沉降场等几种场流分离，都有商品化的仪器很久了，只不过国内鲜有人使用。今年，POSTNOVA的热场+光散射检测器还获得了国际分析仪器展览会的金奖。

PAM 的GPC分离，不是选择大、小孔径的柱子填料的问题，而是PAM与柱子填料的键和问题。所以，填料---硅胶的表面钝化/惰性化是出路，但是好像目前很少有厂家承诺可以做得到。有兴趣的，可以问问那些专门做色谱柱的厂家，看他们有没有，试一试吧。

场流仪的最早应用并不是PAM，楼上的说法有点牵强，且有打广告的意味哦；而最早场流主要是表征polystyrene beads, viruses, and proteins等；可以参考文献：Flow Field-Flow Fractionation: A Versatile New Separation Method
Calvin Giddings, J.; Yang, Frank J. F.; Myers, Marcus N.
Science, Volume 193, Issue 4259, pp. 1244-1245
目前通用的PAM分子量测定还是动态光散射；而GPC与光散射的联用技术因大孔径GPC的问世，已不再成为GPC分离PAM的难点。不过场流也是一种可选的表征手段。

原文由 lanjing231(lanjing231) 发表:

原文由 viscotektegent(viscotektegent) 发表:
场流仪分析PAM应该是最成熟的方法了，至今已经有三、四十年了吧。场流仪最初的应用就是为了分析PAM这种GPC很不好分离的样品的分子量分布，postnova的早期产品F-1000型的最初用户有不少是做PAM分析的，后来才逐渐发展到其他应用领域。
与光散射联机使用的技术也是成熟的技术了。
确实，场流仪价格贵一些，但是分离能力强很多，也还算值得，何况还可以与HPLC/GPC并联使用，以及馏分收集模块等等组成“发烧友”型的分离工具。此外，除了常用的流动场分离，还有热场、离心场、重力沉降场等几种场流分离，都有商品化的仪器很久了，只不过国内鲜有人使用。今年，POSTNOVA的热场+光散射检测器还获得了国际分析仪器展览会的金奖。

PAM 的GPC分离，不是选择大、小孔径的柱子填料的问题，而是PAM与柱子填料的键和问题。所以，填料---硅胶的表面钝化/惰性化是出路，但是好像目前很少有厂家承诺可以做得到。有兴趣的，可以问问那些专门做色谱柱的厂家，看他们有没有，试一试吧。

场流仪的最早应用并不是PAM，楼上的说法有点牵强，且有打广告的意味哦；而最早场流主要是表征polystyrene beads, viruses, and proteins等；可以参考文献：Flow Field-Flow Fractionation: A Versatile New Separation Method
Calvin Giddings, J.; Yang, Frank J. F.; Myers, Marcus N.
Science, Volume 193, Issue 4259, pp. 1244-1245
目前通用的PAM分子量测定还是动态光散射；而GPC与光散射的联用技术因大孔径GPC的问世，已不再成为GPC分离PAM的难点。不过场流也是一种可选的表征手段。

我也并没有说最早应用就只有PAM啊？只不过，做聚合物分析更是场流仪的强项了。场流仪做其它分析，其实也是按照体积分离原理来表征样品的尺寸/体积。不是我牵强了，是你歪曲我的意思了！用动态激光光散射DLS做PAM的分析是做什么的呢？测分子量的话，用静态光散射就可以测得准确了。现在的PAM超大分子量的特别多，动辄就是上千万、几百万的，好像用不上动态DLS了。如果是做分子量/尺寸分布，那么DLS偏差好像又有些大了。目前通用的手段，只不过在国内通用而已，并且不一定正确。在国外，则对GPC色谱柱填料对样品分离的影响认识得很深刻了，研究也很深很细了。所以，目前场流仪在国内的实际用户，大部分都有过在国外使用场流仪的经验。
大孔径GPC并不能解决PAM做GPC分析时产生的问题，因为PAM不仅仅是分子量大、堵柱子，最主要的问题是：PAM自己就像一种凝胶了，它与GPC色谱柱填料容易发生键和，经常会出现进样后不出峰、出峰面积小（即：样品收率低）等等问题，这是大孔径柱子根本无法解决的问题。
其实，还有其他问题呢！当你使用GPC分析超大分子量PAM或者其它大分子样品时，必须减小浓度使样品足够稀！否则样品溶液很容易凝住、呈凝胶状，不是稀溶液了，也就是说，不是牛顿流体了！此时就不能用GPC做了，做了也不对。即使溶液配制好了、足够稀了，那么进样分析后又会产生问题，因为此时浓度很低，往往造成浓度型检测器没有信号响应，或者信号响应很低，已经与基线噪音接近了，GPC仪器不好准确分辨了，也容易造成好像没出峰似的。这种情况下，场流仪的优势就出来了：由于有精密分流装置，可以把大部分、甚至90%的溶剂/流动相吹掉（浓度提高了！），再进检测器，这样就提高了浓度型检测器的检测灵敏度，使得超大分子量样品分析数据更准确了。
此外，柱子填料对样品的剪切效应、支化样品与柱子填料的缠绕效应，都影响了分子量分布数据的准确性。这些，不仅是GPC无法解决，也更是激光散射无法解决的问题。这些内容可是挺难的呢（不比激光散射的技术知识容易多少）。而场流分离是一种温和的分离技术，这些问题就都不会发生了，因为分离通道内是空的、无填料的。对于分子量不是很大的样品，GPC一般就足够了，但是PAM的作用是增稠剂、增粘剂，在油田上往往用作三次采油的助剂。所以对超大分子量PAM需求这些年呈上升趋势——直接关系到石油的采收率，因此场流仪还是有用武之地的。何况，即使是小分子量的PAM，也会与凝胶填料键和，所以PAM分析最好还是用乌氏毛细管粘度仪和场流仪分析分子量，效果较好。当然用激光散射可以直接得到重均分子量。但是，GPC和场流仪FFF，值钱的就是分离能力！！！也就是分子量分布的数据。激光散射只不过是一种检测器而已。检测器很多，实在不行还可以用大个儿的，例如：质谱、核磁等等。但是分离手段可是很有限的啊！
目前，场流仪分析PAM，在国内已经有实际用户了，也做了一些样品分析，效果还是不错的，尤其是对从AM POLYMER购得的900万DALTON的PAM标样，分析效果更好。