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液相色谱（LC）

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主题：【已应助】液相色谱空白出峰

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Ins_e34a7519

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发表于：2022/03/04 09:11:43 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我的流动相是0.1%甲酸水（A)，100%甲醇(B)
洗脱梯度是0-5min 5-40%B，5-10min 40-86%B，10-18min 86-90%B，18-25min 90-92%B
色谱柱是反相色谱柱C18，4.6×100mm，3.5μm
纯甲醇作为空白样
甲醇用的是Merck的，过了0.22μm的膜
3.4min出现的峰响应值特别高，请问各位大神，这个峰是与什么有关？会和我的洗脱梯度有关吗？我的洗脱梯度设置的时候最后没有回到最初的比例，会不会对柱子有损坏？

推荐答案：歪果仁zZ回复于2022/03/07

首先，液相色谱梯度条件遵循的原则是牙形洗脱，即结束时的流动相状态要回到初始流动相状态，这样才能形成一个稳定的循环，才能保证方法的重现性，也是保证目标峰准确定性定量的前提。另外，空白有峰，进样器、色谱柱、流动相都可能出了问题，此外，考虑是不是实验操作过程中发生了污染。

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2022/3/4 10:00:05 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1.流动相比例问题---------楼主的初始比例应该是甲酸水95%---甲醇5%，最后是甲酸水8%------甲醇92%，最后的比例最好是回到初始比例哈，不然下一针跟上一针会系统不稳没很难比对。
2.3.4min大概率是溶剂峰，不用担心，对于LC来说5min前的都可看作是没什么保留时间的溶剂峰，入伏哦是目标物在5min前出来的要想办法演出目标物的保留时间。
3.方法-------------------LC方法甲醇初始比例太低，在10min内升到了86%，增加了81%，抬升太快，导致这段时间的基线很难看，建议楼主再调整方法，在不影响分析的情况下可以增加初始甲醇的比例

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dadgoh

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2022/3/4 10:07:56 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

最后梯度应慢慢回到初始比例一段时间，待基线平直后再进样。另外，溶样最好使用初始比例流动相。以减少进样峰。

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Ins_e34a7519

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新手级：新兵

2022/3/4 10:21:08 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 歌名(Ins_eedcdc41) 发表:1.流动相比例问题---------楼主的初始比例应该是甲酸水95%---甲醇5%，最后是甲酸水8%------甲醇92%，最后的比例最好是回到初始比例哈，不然下一针跟上一针会系统不稳没很难比对。2.3.4min大概率是溶剂峰，不用担心，对于LC来说5min前的都可看作是没什么保留时间的溶剂峰，入伏哦是目标物在5min前出来的要想办法演出目标物的保留时间。3.方法-------------------LC方法甲醇初始比例太低，在10min内升到了86%，增加了81%，抬升太快，导致这段时间的基线很难看，建议楼主再调整方法，在不影响分析的情况下可以增加初始甲醇的比例

我最开始用的洗脱梯度是0-10min 92-86%B，10-22min 86-80%B，22-35min 80-50%B，35-45min 50-20%B，45-50min 20-92%B
这个洗脱梯度洗出来我的样品峰全部都挤在前9min，所以我就把起始有机相浓度降低了很多

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