主题：【资料】全能核酸酶SuperNucleaseFAQ详解：解开核酸酶的神秘面纱

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发表于：2023/10/25 14:45:47 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

全能核酸酶（SuperNuclease）是一种来自于粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens），经基因工程改造的核酸内切酶。可降解双链、单链、线状、环状的DNA和RNA，完全将核酸降解成3~5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸。义翘神州不仅可以提供研究级核酸酶，依托于ISO 13485和GMP体系，还可提供高效、高质量、应用广的GMP级别全能核酸酶。同时我们提供核酸酶残留检测试剂盒，在解决生物制品核酸污染的同时，有效降低酶本身的残留风险。下面通过问答形式向大家详解全能核酸酶：

Q：如何处理粘附细胞？

A：用PBS洗涤后，向100μL RIPA裂解物（或其他哺乳动物细胞裂解物）中加入1-5μL全能核酸酶，在室温下孵育30min，收集裂解物，离心上清液进行下游实验。

Q：如何处理悬浮细胞？

A：离心收集悬浮细胞后，将100μL RIPA裂解物（或其他哺乳动物细胞裂解物）加入含有1-5μL全能核酸酶的离心管中，在室温下孵育30min，收集裂解物，离心上清液进行下游实验。

Q：如何处组织样本呢？

A：研磨30～100mg动植物组织后，加入100～200μL裂解液和1～5μL全能核酸酶，室温孵育30min，收集裂解液并离心上清液进行下游实验。

Q：大肠杆菌或其他细菌呢？

A：离心收集细菌后，裂解液或研磨破碎后，每100μL加入1~5μL全能核酸酶，室温孵育30min，收集裂解液，离心上清液进行下游实验。

Q：如何稀释

A：正常推荐稀释比（终浓度）为1:1000～1:20000，其中时间、温度和稀释比是影响反应的积极因素。

Q：是否用PBS稀释

A：是

Q：你能减少剂量吗

A：如果你想减少剂量，可以适当提高反应温度或延长反应时间

Q：反应辅因子

A：必须向反应溶液中加入2-5mM Mg2+

Q：反应缓冲液

A：常用的生物缓冲液，如TBS、MOPS（pH6-8）等

Q：稀释后每次使用多少？如何测试梯度？一开始多少钱？

A：根据不同的实验要求，添加量可以在1/100和1/10000之间。真核细胞所需的量高于原核细胞，因为真核细胞的核酸含量高，并且可以按照1/1000的比例添加真核细胞初始添加量，可以按照1/10000的比例添加原核细胞。由于全能核酸酶活性在室温下较高，因此在4℃下消化的DNA添加比例高于室温下。普通的CoIP实验、蛋白质表达实验可以适当地略微增加，并且可以按照1/100的比例添加对DNA残基要求高的实验。

Q：如何灭活全能核酸酶？如何移除？

A： EDTA螯合金属离子的使用可以可逆地抑制全能核酸酶的活性，极端条件下可以引起不可逆的失活，如100mM NaOH和70℃处理30min。可以通过阴离子交换柱或气相色谱法从目标产物中分离全能核酸酶。由于这种核酸内切酶的高稳定性，建议不要在最终产物需要排除核酸酶的应用中使用全能核酸内切酶。

Q：储存条件

A：储存温度为-20℃。储存缓冲液：20mM Tris-HCl pH 8.0，50mM NaCl，2mM MgCl2，50%甘油。

Q：全能核酸酶应用

A：

1、蛋白质提取过程中核酸污染的去除：当重组蛋白质纯化或哺乳动物细胞裂解物下游需要低粘度时，全能核酸酶可用于降低样品粘度，以便于操作；

2、有效减少储存的外周血单个细胞（PBMC）的聚集；

3、有利于不溶性蛋白在复性前的高质量包合体系制备；

4、有效去除带负电荷核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响；

5、在宽范围的条件下（6M尿素、0.1M盐酸胍、0.4%Triton X100、0.1%SDS、1mM EDTA、1mM PMSF），降解所有形式的（双链、单链、线性、环状）DNA和RNA；

6、根据美国食品药品监督管理局的核酸污染去除程序，去除蛋白质产品中的污染；

7、本品可与多种细胞细菌裂解液配合使用，去除粗提液中的核酸，降低溶液粘度，提高蛋白质产量。

义翘神州提供不同级别全能核酸酶，GMP级条件下生产的全能核酸酶SuperNuclease，无动物源性，可高效降解单链、双链、线性、环状、超螺旋等任何形式的DNA及RNA。超高活性，应用场景广泛且使用量低不易残留，质量、性能、供货能力可靠，并已完成在FDA的药物主文件申报备案（DMF Number#:35978），满足药物申报的规范。

更多详情可以关注：https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit

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