主题:【已应助】流动相添加三氟乙酸基线陡增

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请教大家,测定多肽纯度时,使用0.1%的三氟乙酸水/乙腈做流动相,检测波长为210nm。如接色谱柱,在梯度发生变化时,基线会陡增,之后稳定;但如果接两通,基线不会出现陡增而是缓慢上升,不知道大家有没有遇到这种情况?有没有办法降低基线的陡增?
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推荐答案:检测老菜鸟回复于2023/10/27
请教大家,测定多肽纯度时,使用0.1%的三氟乙酸水/乙腈做流动相,检测波长为210nm。如接色谱柱,在梯度发生变化时,基线会陡增,之后稳定;但如果接两通,基线不会出现陡增而是缓慢上升,不知道大家有没有遇到这种情况?有没有办法降低基线的陡增?

首先,造成这种的原因有两方面,我认为第一个是三氟乙酸本身引起的,低波长的强吸收。不管是缓慢还是陡增。第二个有可能是因为你使用时是不是只用了水相加三氟乙酸,一般做这个,可以有机相也要加一点。梯度变化时,柱子中压力较大,两相没有混合好或者其他原因导致陡增或者漂移,而两通压力较小,所以只会缓慢增加。当然柱子本身也可能影响。
所以可能的排查和解决方法,第一,有没有新柱子,可以试一下。第二,看是否需要波长调整一下。第三,如果有机相没有加,可以加同比例的三氟乙酸。第四,换掉三氟乙酸,看看文献,选择其他试剂。
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请教大家,测定多肽纯度时,使用0.1%的三氟乙酸水/乙腈做流动相,检测波长为210nm。如接色谱柱,在梯度发生变化时,基线会陡增,之后稳定;但如果接两通,基线不会出现陡增而是缓慢上升,不知道大家有没有遇到这种情况?有没有办法降低基线的陡增?

首先,造成这种的原因有两方面,我认为第一个是三氟乙酸本身引起的,低波长的强吸收。不管是缓慢还是陡增。第二个有可能是因为你使用时是不是只用了水相加三氟乙酸,一般做这个,可以有机相也要加一点。梯度变化时,柱子中压力较大,两相没有混合好或者其他原因导致陡增或者漂移,而两通压力较小,所以只会缓慢增加。当然柱子本身也可能影响。
所以可能的排查和解决方法,第一,有没有新柱子,可以试一下。第二,看是否需要波长调整一下。第三,如果有机相没有加,可以加同比例的三氟乙酸。第四,换掉三氟乙酸,看看文献,选择其他试剂。
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原文由 检测老菜鸟(v3295053) 发表:
请教大家,测定多肽纯度时,使用0.1%的三氟乙酸水/乙腈做流动相,检测波长为210nm。如接色谱柱,在梯度发生变化时,基线会陡增,之后稳定;但如果接两通,基线不会出现陡增而是缓慢上升,不知道大家有没有遇到这种情况?有没有办法降低基线的陡增?

首先,造成这种的原因有两方面,我认为第一个是三氟乙酸本身引起的,低波长的强吸收。不管是缓慢还是陡增。第二个有可能是因为你使用时是不是只用了水相加三氟乙酸,一般做这个,可以有机相也要加一点。梯度变化时,柱子中压力较大,两相没有混合好或者其他原因导致陡增或者漂移,而两通压力较小,所以只会缓慢增加。当然柱子本身也可能影响。
所以可能的排查和解决方法,第一,有没有新柱子,可以试一下。第二,看是否需要波长调整一下。第三,如果有机相没有加,可以加同比例的三氟乙酸。第四,换掉三氟乙酸,看看文献,选择其他试剂。
非常感谢您的回复。仪器和色谱柱都是新的;多肽最大吸收波长是210nm,所以波长不好调整;有机相里也添加了0.1%的三氟乙酸。其实缓慢上升是可以接受的,但是只在梯度变化的一瞬间陡增,后面又平稳了,感觉没法解释,出报告的时候图谱也不好看。
检测老菜鸟
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原文由 ZPlus(v3053443) 发表:
非常感谢您的回复。仪器和色谱柱都是新的;多肽最大吸收波长是210nm,所以波长不好调整;有机相里也添加了0.1%的三氟乙酸。其实缓慢上升是可以接受的,但是只在梯度变化的一瞬间陡增,后面又平稳了,感觉没法解释,出报告的时候图谱也不好看。
梯度平缓一点。 
检测老菜鸟
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原文由 ZPlus(v3053443) 发表:
非常感谢您的回复。仪器和色谱柱都是新的;多肽最大吸收波长是210nm,所以波长不好调整;有机相里也添加了0.1%的三氟乙酸。其实缓慢上升是可以接受的,但是只在梯度变化的一瞬间陡增,后面又平稳了,感觉没法解释,出报告的时候图谱也不好看。
有空可以把方法和图谱放一下。
有水有渝
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210下三氟乙酸是有紫外吸收的,可以有机相与水相中都加入同等比例的三氟乙酸,这样不管梯度怎么变化三氟乙酸的比例都不会变,另外有机相用的是甲醇还是乙腈,最好用乙腈,紫外吸收小,把你的流动相变化过程发上来看一下。
jjiang2
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