摘要：建立了猪肉、猪肝等动物源性食品中18种β-受体激动剂残留的QuEChERS-UPLC-MS/MS检测方法。样品中的β-受体激动剂用β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶酶解、高氯酸沉淀蛋白、离心后上清液经过乙酸乙酯、叔丁基甲醚萃取，采用QuEChERS法净化，Inspire PFP色谱柱分离，正离子多反应监测模式检测(MRM),内标法定量。该方法18种受体激动剂在1 ng/mL～50 ng/ml范围内线性关系良好(R2>0.99)。方法检出限和定量限分别为 0.2 μg/kg、0.5 μg/kg，加标回收率在72%～118%之间，相对标准偏差为4.28%～10.38%。该方法前处理简单、净化效果好、灵敏度高。可用于动物源性食品中β-受体激动剂残留检测。

关键词：β-受体激动剂；QuEChERS；超高效液相色谱-串联质谱法；猪肉；猪肝

目前β-受体激动剂的检测方法主要有LC-MS^1,2、GC-MS^3,4和ELISA^5,6。ELISA法操作简单、特异性强适合高通量快速分析，但通常检测种类有限，可能存在假阳性。GC-MS法可以用于多残留检测但是前处理过程需要衍生化，步骤相对复杂。LC-MS是目前检测 β-受体激动剂最常用的方法。样品前处理通常采用固相萃取（SPE）方法，需淋洗、洗脱等过程，本研究采用新型除脂聚合物材料，结合QuEChERS净化原理，建立了一种简单、快速、准确测定动物源性食品中β-受体激动剂残留的方法。

1.仪器设备及试剂耗材

1.1 仪器设备

1.1.1 AB SCIEX 4000+型超高效液相色谱-质谱联用仪(AB公司)

1.1.2 HSC-24B氮吹仪（天津恒奥科技发展有限公司）；

1.1.3 GT10-1型高速离心机（北京时代北利）；

1.1.4 Vortex-5型旋涡混合器（其林贝尔仪器）

1.2试剂耗材

1.2.1甲醇（色谱纯，迪马科技）；

1.2.2乙腈（色谱纯，迪马科技）；

1.2.3叔丁基甲醚（色谱纯，迪马科技）；

1.2.4甲酸（色谱纯，迪马科技）；

1.2.5乙酸铵（色谱纯，迪马科技）；

1.2.6葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶（Merck公司）

1.2.7 Inspire PFP液相色谱柱（100×2.1 mm，3 μm，迪马科技）；

1.2.8 ProElut QUE净化管（2 mL，迪马科技）。

1.3标准溶液

1.3.1标准储备液：18种β-受体激动剂混合标准溶液（100 μg/mL，溶剂甲醇，迪马科技）

1.3.2内标储备液：精密称取适量克伦特罗-D9、莱克多巴胺-D6、沙丁胺醇-D3、西马特罗-D7、齐帕特罗-D7、氯丙那林-D7、特布他林-D9、西布特罗-D9、盐酸马布特罗-D9、盐酸班布特罗-D9、克仑丙罗-D7、盐酸妥布特罗-D9、羟甲基克仑特罗-D6，用甲醇溶解并定容，配制成浓度为10 μg/mL内标储备液。4℃保存，有效期6个月。

1.3.3 标准工作液：准确吸取适量混标储备液，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为0.1 μg/mL标准工作液。

1.3.4 内标工作液：准确吸取适量内标储备液，用甲醇稀释并定容，配制成浓度为0.1 μg/mL内标工作液。4℃保存，有效期6个月。

2、样品提取

准确称取样品2.0 g于离心管中，加6 mL 0.2 mol/L乙酸铵缓冲液、40 μLβ-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶，涡旋混匀，37℃避光水浴16 h，加100 μL 0.1 μg/mL内标工作液，涡旋混匀，8000 rmp离心8 min，取出上清。向下层残渣加5 mL 0.1 mol/L高氯酸溶液，涡旋5 min, 8000 rmp离心8 min，取上清与前一步上清混匀，高氯酸调pH值至1.0±0.2，8000 rmp离心8 min，取出上清，将上清液用10 mol/L NaOH溶液调pH至10.0±0.5。加乙酸乙酯15 mL，涡旋5 min, 5000 rmp离心5 min，取上层有机相。下层水相中再加入10 mL叔丁基甲醚，涡旋5 min, 5000 rmp离心5 min，取上层有机相。合并两次有机相，混匀，50℃水浴氮吹至干，用0.5 mL甲醇溶解残渣,再加入0.5 mL0.1%甲酸水定容到1 mL，混匀，待净化。

3、样品净化

将待净化液全部转移到ProElut QUE净化管中（内含PLS-A净化材料），涡旋2 min, 8000 rmp离心2 min，上清液过尼龙膜，待分析。

4、仪器条件

色谱条件色谱柱：Inspire PFP，100×2.1 mm，3 μm；流速：0.3 mL/min；进样量：5 μ L；柱温：35 ℃；流动相A为0.1%甲酸水溶液，B为0.1%甲酸乙腈，梯度洗脱程序：0～2 min，95% A；2～12 min，95% A～40% A;12~15 min,10% A;15~20 min,95% A。质谱条件离子源：ESI(+)；扫描方式：正离子扫描；检测模式：多反应监测；电喷雾电压：5500 V；雾化气压力：50 psi；辅助气压力：50 psi；气帘气压力：20 psi；离子源温度：500 ℃。定性离子、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见表1。18种β-受体激动剂和13种内标典型色谱图见图1。

5、结果

猪肉和猪肝中18β-受体激动剂在1 ng/mL～50 ng/ml范围内线性关系良好(R2>0.99)。方法检出限和定量限分别为 0.2 μg/kg、0.5 μg/kg，加标回收率在72%～118%之间，相对标准偏差为4.28%～10.38%。

6. 结论

本文基于超高效液相色谱-串联质谱技术建立了一种快速有效的猪肉、猪肝中18种β-受体激动剂残留检测方法，获得了满意的净化效果和检测灵敏度，回收率和定量限均满足残留分析的要求。
表1 1种β-受体激动剂和13种内标的质谱条件信息表
Tab. 1 MS parameters of 18 β-receptor blockers and 13 internal standard

目标物名称	定性离子对	定量离子对	DP	CE
	(m/z)	(m/z)	(V)	(V)
	(母离子/子离子)	(母离子/子离子)
克伦特罗	277.0/203.0	277.0/203.0	40	21
克伦特罗	277.0/168.1	277.0/203.0	40	38
克伦特罗-D9	286.0/204.0	286.0/204.0	50	23
莱克多巴胺	302.2/164.1	302.2/164.1	40	23
莱克多巴胺	302.2/107.1	302.2/164.1	40	51
莱克多巴胺-D6	308.1/168.1	308.1/168.1	40	23
沙丁胺醇	240.2/148.1	240.2/148.1	40	24
沙丁胺醇	240.2/222.1	240.2/148.1	40	15
沙丁胺醇-D3	243.1/151.0	243.1/151.0	30	25
西马特罗	220.0/202.0	220.0/202.0	40	13
西马特罗	220.0/160.0	220.0/202.0	40	22
西马特罗-D7	227.2/161.1	227.2/161.1	40	23
齐帕特罗	262.1/185.0	262.1/185.0	40	32
齐帕特罗	262.1/202.1	262.1/185.0	40	25
齐帕特罗-D7	269.1/185.0	269.1/185.0	40	32
氯丙那林	214.0/154.1	214.0/154.1	40	23
氯丙那林	214.0/118.0	214.0/154.1	40	34
氯丙那林-D7	221.0/155.0	221.0/155.0	40	23
特布他林	226.2/152.0	226.2/152.0	40	21
特布他林	226.2/107.1	226.2/152.0	40	36
特布他林-D9	235.2/153.1	235.2/153.1	40	20
西布特罗	234.0/160.1	234.0/160.1	40	21
西布特罗	234.0/143.0	234.0/160.1	40	34
西布特罗-D9	243.2/161.1	243.2/161.1	40	21
马布特罗	311.1/237.2	311.1/237.2	40	24
马布特罗	311.1/202.1	311.1/237.2	40	40
马布特罗-D9	320.1/238.0	320.1/238.0	40	24
溴布特罗	367.0/293.0	367.0/293.0	40	24
溴布特罗	367.0/349.2	367.0/293.0	40	17
班布特罗	368.2/294.1	368.2/294.1	40	26
班布特罗	368.2/72.2	368.2/294.1	40	37
班布特罗-D9	377.2/295.1	377.2/295.1	40	26
克仑丙罗	263.1/245.1	263.1/245.1	40	15
克仑丙罗	263.1/203.0	263.1/245.1	40	24
克仑丙罗-D7	270.0/204.0	270.0/204.0	40	25
妥布特罗	228.0/154.0	228.0/154.0	40	21
妥布特罗	228.0/118.0	228.0/154.0	40	35
妥布特罗-D9	237.0/155.0	237.0/155.0	40	21
利托君	288.1/121.1	288.1/121.1	45	29
利托君	288.1/150.1	288.1/121.1	45	25
克仑赛罗	319.1/203.0	319.1/203.0	50	26
克仑赛罗	319.1/132.0	319.1/203.0	50	39
马喷特罗	324.9/237.9	324.9/237.9	50	20
马喷特罗	324.9/217.9	324.9/237.9	50	29
克仑潘特	291.0/203.0	291.0/203.0	30	21
克仑潘特	291.0/132.1	291.0/203.0	30	38
羟甲基克仑特罗	293.0/203.0	293.0/203.0	30	23
羟甲基克仑特罗	293.0/132.1	293.0/203.0	30	28
羟甲基克仑特罗-D6	299.0/203.0	299.0/203.0	40	25

注：溴布特罗、马喷特罗采用克伦特罗同位素内标定量，利托君、克仑赛罗、克仑潘特采用莱克多巴胺同位素内标定量。

图1. （10 ng/mL）检测的总离子流图

Fig. 1 Total ion chromatogram of 18 β-receptor blockers (1 ng/mL) and 13 internal standard (10 ng/mL) mixed standard solution

参考文献

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