主题：【资料】T细胞培养的原理及方法：探索细胞因子在免疫反应中的关键作用

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发表于：2024/01/31 14:14:55 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

T细胞培养是指在体外模拟体内环境，使T细胞能够生存、生长和繁殖的一种技术。在T细胞培养中，细胞被置于无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件的环境中，以保持其活力和功能。T细胞培养被广泛应用于免疫学、生物医学和药物研发等领域，是研究T细胞功能、探索免疫反应机制的重要手段。通过T细胞培养，科学家可以观察和分析T细胞的增殖、分化、凋亡以及细胞因子分泌等过程，了解其在免疫应答中的作用。同时，T细胞培养也为疾病治疗和预防提供了新的思路和手段，如免疫疗法、疫苗研发和细胞治疗等。

T细胞培养的原理是通过复合抗体孵育标记脾脏细胞中除T细胞以外的其他细胞，再用磁珠结合抗体，然后用磁极吸附磁珠，那剩下的就是没有结合磁珠的T细胞了。

t细胞培养方法包括以下步骤：

①抗体包被培养板：用无菌PBS制备5~10 μg/mL的CD3抗体，然后在96孔板的条件孔中，每孔加入50 μL抗体溶液。

②接种细胞：在抗体包被的培养板中接种T细胞，然后将培养板置于37℃培养箱中2小时或者提前一天准备培养板，置于4℃过夜。

③洗涤和消化：在接种细胞之前，用移液枪将培养孔中的50 μL抗体吸出，然后用200 μL PBS洗涤培养孔并弃去PBS。重复此步骤以去除所有未交联的抗体。

④细胞消化：将细胞培养瓶竖立放置，吸走培养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说明细胞现在很容易脱落，只要加入1ml的PBS+EDTA（0.02%），来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落，加入10mlMEM，混匀，不能吹打，分装2瓶。如果细胞没长满就脱落，则只需加入5mlMEM，不分装。如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固，培养基上清没有细胞脱落碎片，且细胞长满达到80％以上，吸走培养基，加入5ml的PBS+EDTA（0.02%），迅速轻微晃动，竖立培养瓶，吸走，加入1ml0.05%胰酶，37度消化不超过3min，细胞完全消化脱壁，取出加入10ml培养基轻微吸打混匀，分装2瓶。

⑤培养：将分装的T细胞接种到新培养瓶中，通常T25加10~12ml培养基培养，2~3天左右换液一次，若培养基变黄及时换液，以维持一个相对稳定的培养条件，有利于细胞活正常生长。

不管是我们实验室中常规的细胞培养，还是临床上的CAR-T细胞治疗等，提高T细胞的增殖和持久性，以及增强细胞再免疫抑制性TME中的功能，都离不开细胞因子。

细胞因子是由免疫细胞（如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等）和某些非免疫细胞（内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等）经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。具有调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长、APSC多能细胞以及损伤组织修复等多种功能。

细胞因子可被分为白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF)、集落刺激因子(CSF)、趋化因子、生长因子(GF)等。

细胞因子γ链共受体家族包括IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21，它们在T细胞分化、增殖和内环境稳定中起着关键作用。他们受体包括共同的γ链（γc）和一个各自单独的受体链，下游信号激活STAT信号通路。

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