本篇内容就介绍一下
液相色谱系统。
液相色谱系统是由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵和色谱柱是关键分离部分,检测器就好比
液相系统的眼睛,让分离结果显示在图谱上。现在的系统普遍是自动化模式,配备自动进样器、在线脱气机、柱温控制器、柱切换器等。制备型色谱仪还带有自动馏分收集器。
输液泵,目前最常见的是柱塞往复泵,柱塞泵是依靠柱塞在缸体中往复运动,使密封腔的容积发生变化,来实现吸液和送液。通过改变电机的转速即可方便地调节流速,其泵压可达40Mpa以上。但缺点就是输液的脉冲比较大,目前多采用双柱塞泵,双柱塞泵连接方式也有两种:并联式和串联式,而并联的方式下流速的稳定性相对更好。
进样器,装在色谱柱的前端,要求耐压高、密封性好、死体积小,目前常见的有六通阀手动进样器和自动进样器。六通阀进样方式有部分进样和满环进样两种:部分进样的进样体积应不大于定量环体积的75%,才能确保进样的准确性,进样多于75%会由于管壁效应,有部分流出;满环进样的进样体积应大于定量环体积的3倍,才能完全置换定量环内的流动相,消除管壁效应,确保准确性。色谱柱,是整个
液相色谱系统的核心,其实前面文章多有介绍,HPLC色谱柱通常由柱管、柱帽、筛板和填料组成。对色谱柱的要求主要是选择性好、柱效高,分离快。那么就要求我们的色谱填料粒径更小,整个
液相系统的耐压更高。随着科学技术的不断发展,目前的
液相系统耐压可达100Mpa以上,填料粒径可做到1.6μm以下。色谱柱的优劣主要看填料质量性能和装填技术。填料的评价指标包括填料的粒径均一度、孔径的分部、金属杂质含量、键合相的稳定性,机械强度等;填装技术需要考虑的因素包括装柱师傅的经验、匀浆试剂的配比、装柱压力的选择、环境的温湿度等。
检测器,作为
液相色谱系统的眼睛,把经过色谱柱逐一分离出来的组分信号转变成电信号,在软件采集的图谱中显现出来。
液相色谱中常用的检测器主要是光学检测器,包括紫外、荧光、示差折光、蒸发光散射等。而紫外检测器是应用最广泛的检测器,紫外检测器的检测波长范围一般为?190nm~400nm,如果加上钨灯就是紫外-可见检测器,检测范围190-800nm。数据记录和处理系统,现在的
液相系统都是通过计算机软件远程控制色谱仪器,采集并记录数据,还可以离线分析已保存的数据,目前的
液相系统操作上更趋于智能化,便捷化,不断地优胜劣汰。