主题：【分享】方法验证中验证指标顺序的排布考虑

浏览0 回复0 电梯直达

p3203140

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

发表于：2024/10/23 21:26:19 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

一个验证方案的起草，其主体内容就是验证指标的选择和接受标准的制定和设计，为了验证工作的顺利和高效进行，避免做一些无用的实验，验证指标的进行顺序和方案设计中也有一定的考虑，以下主要针对外标法有关物质验证的顺序进行说明，含量及溶出等验证可参考，但不一定适用。

例：方法验证的内容，基本就以下验证内容，不同使用目的的方法，其验证指标会有差异

在设计验证方案的时候，需要同步考虑验证内容的先后顺序，特别是针对刚开始做方法验证的新手，验证方案往往不是自己起草的，新手拿到方案一般会按照设计的验证顺序往下做，为了尽量少出问题，设计方案时就需要兼顾待验证内容的先后顺序。

①第一位：系统适应性。系统适应性的评价参数一般包含理论塔板数（N），分离度（R），拖尾因子（T）及精密度（RSD%，也有人叫重复性）等指标，分析人员有时候会忘记精密度这个指标，因为有些方法中就没有用于评价分离度或拖尾因子的系统适应性溶液，也没有精密度溶液（一般是对照溶液重复进样5针及以上），但方法验证的时候需要评估系统精密度，如果仪器的精密度都保证不了，那后续其他的验证的数据都是值得怀疑的，所以有时候验证系统适应性，考察的却是系统精密度，（不要杠：验证了就能一定保证后面数据没问题了吗）

②第二位：专属性。为了验证的效率，一般会和系统适应性合并以“系统适应性及专属性”放到一起做，没必要分开，分开可能还得多进1针空白溶液，现实真的会出现验证到后面，有些杂质分不开的情况，所以放到最前面验证，提前确认杂质能不能分开。

③第三位：溶液稳定性。仪器的精密度和溶液的稳定性，是其他验证数据可靠性的基石，溶液不稳定，蹭蹭蹭一路做了线性和准确度，最后发现溶液不稳定，前面验证的数据还能不能用？当然方法开发的时候也会考察溶液稳定性，会有一个初步的评估，但是方法开发的时候，杂质很少到齐（也有的能到齐），可能也就考察了主化合物，评估不够全，为了保险起见，溶液稳定性还是放到方法验证的前期做，可以将前面系统适应性中配制的定位溶液（或储备溶液等）以稳定性进样的时间为0点往下进行考察，如果24小时数据均显示稳定，真实的稳定性肯定是大于24小时的（毕竟前面配制完又放置了一段时间）；如果杂质很多，全部配制完就排序列，假如一针60min，有10个杂质，最后一个杂质采集时溶液已经放了10小时了，如果溶液不稳定，无法评估0-9小时之间是什么情况，所以溶液稳定性，为了最少的偏差，还是临用现配后走序列。

④第四位：LOQ或LOD。有些方法不是自己开发的，真不知道方法的灵敏度是否满足要求，即使自己开发的方法，如果不去做LOQ，不具备结构的敏感性，还真不一定能识别灵敏度的风险。做到LOQ才发现方法灵敏度不够，在回去优化方法，只能说“杯具”。

例，下述API有关物质方法，采用醋酸钠缓冲液-甲醇（75：25）为流动相，色谱柱为C18 250*4.6mm 5um；检测波长：268nm；进样量：20μL；供试品浓度为1mg/mL，AB杂质限度为0.05%，杂质A，B的灵敏度就是风险。

268nm的紫外吸收峰是API中右边环贡献的，杂质AB都没有API中的右边环，只有两个苯环，苯环在268nm的紫外吸收是很低的，方法的灵敏度就成了问题，杂质AB在268和API的响应差异很大，需要采用外标法或双波长进行检测。

⑤第五位：准确度。准确度和线性，重要性还是准确度更大一点，因为线性，只要不是移液有问题及方案搞错，大部分都能过；杂质的准确度采用液相来做，只要不是衍生方法，准确度问题不大，举个例子，吡拉西坦的有关物质方法验证，准确度得到以下数据：

杂质A，D回收率明显偏高，杂质A尤其大，主峰拖尾，导致积分会包含一部分主峰（比较久了，但确实是这个原因），杂质D纯属设计上的失误，考察溶液稳定性的时候，只考察了各个杂质的稳定性，没考察主化合物的稳定性，结果是主化合物在该稀释剂条件下水解产生杂质D（酰胺的水解很正常，后期也遇到不少）

⑥第六位：线性。顺序上后期可以自由调整。但是线性不过的也有不少.

⑦第七位：重复性和中间精密度。重复性一般会和准确度一起做，两者共用用对照溶液，减少额外的分析时间.

⑦第八位：耐用性。耐用性不是一个合格性的验证指标，它允许出现不合格的数据，看到部分人员把耐用性验证不符合要求走偏差，耐用性的目的是评价改变参数对检测结果的影响程度，不合格只能说明这个参数对检测结果影响较大，改变参数的行为已经偏离了正常方法，还走偏差，不合格，继续收紧参数的范围，找到一个合适的控制范围，保证达到检测目的就行。非要走偏差，只能说需要找点事做。

上面这些先后顺序，特别是后面几个，可以根据验证的工作需要，灵活调整，穿插进样，不是死的，自己灵活把握。

恭喜您！提交成功

主题：【分享】方法验证中验证指标顺序的排布考虑