在液相分析中使用衍生化试剂邻苯二醛和三巯基丙酸，图见附件中图1。现有如下问题请教：
1.分析物质加入上述衍生化试剂和仅有衍生化试剂跑出的图和附件中图1的图形大体相同，只是后面大峰的峰高不同，前面小峰的峰高基本一致，分析物质的出峰位置应在大峰位置，这样能够说明分析物质的图谱可用吗？
2.跑分析物质的时候，主峰峰高不稳定，会一直降低，但前面杂质峰基本不变，是什么原因呢？
3.跑一段时间后，也就两三小时吧，峰形就会变差，出现不对称现象，图见附件中图2，怎样避免呢？估计是由于衍生化试剂残留在柱子和紫外检测器中，冲洗可改善峰形，有什么好方法避免呢？
谢谢各位不吝赐教

图

附件：

图

推荐答案：xulili_803011回复于2007/09/20

在衍生化反应中，并非所有的衍生化试剂都要反应掉，通常我们加入的衍生化试剂的量要过量，有时甚至加入的量很大，而真正参加反应的则很少，只要衍生化产物的出峰时间不与其他的峰重合就可以，我认为你的两个谱图中前面的小峰的面积和高度相差不大，可能是于有你加入的衍生化试剂远远过量引起的，你可以减少衍生化试剂的量，看看目标化合物的峰面积是否改变。
第2和3点问题，不知道你是否作了稳定性实验，这有可能是稳定性的问题。

建议你改变衍生化试剂与反应物的配比，反应温度，反应时间等条件，寻找最佳的衍生化条件，找到最佳反应条件后，在对反应物和衍生化以后的目标化合物做一下稳定实验，看看它们的稳定时间，只有在稳定时间内的实验数据才是可靠的

补充答案：

wangyh186回复于2007/09/12

你查一下资料，我觉得衍生条件不对，没有反应完全，或者衍生试剂不对，衍生物不稳定。更换衍生化试剂。

bocai回复于2007/09/13

应该是没有衍生成功，建议将实验条件发上来让大家看看，帮你查原因。

longly回复于2007/09/18

你还是把你的具体分析条件写上来吧！如果不是谁也帮不了你，太多因素在内面了，而且你可能一直是用等度洗柱的，你的分离方法和流动相应该有点问题！

Mix_Grey回复于2007/09/19

看了你说的问题,我认为问题很简单,主要是由于你的流动相条件没有选择好,衍生化试剂和分析物的衍生化产物峰重合.
解决办法:改变流动相的有机相比例,调节pH,调节离子强度来将二者分开.这样,3个问题都可以解决.

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2007/9/12 10:59:00 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

你查一下资料，我觉得衍生条件不对，没有反应完全，或者衍生试剂不对，衍生物不稳定。更换衍生化试剂。

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bocai

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2007/9/13 10:05:00 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

应该是没有衍生成功，建议将实验条件发上来让大家看看，帮你查原因。

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longly

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2007/9/19 9:21:00 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 longly 发表:
你还是把你的具体分析条件写上来吧！如果不是谁也帮不了你，太多因素在内面了，而且你可能一直是用等度洗柱的，你的分离方法和流动相应该有点问题！

具体条件如下：
流动相：以醋酸盐缓冲液（取醋酸钠6.8g，加水700ml使溶解，用醋酸调节pH值至5.9，加水至1000ml）-甲醇（95：5）为流动相；检测波长为340nm。
测定法：精密量取0.1mol/L硼酸盐缓冲液（pH值9.5）400ul，置适宜容器中，精密加入供试品溶液100ul（0.5mg/mL）和衍生化试剂（取邻苯二醛100mg，加无水甲醇2.5ml，加3-巯基丙酸0.1ml和0.1mol/L硼酸盐缓冲液22.4ml，摇匀。黑暗处放置30分钟后使用。)100ul混合，衍生化反应进行1分钟，精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图
多谢大家指教

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2007/9/19 15:06:00 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 wuyinghao 发表:
看了你说的问题,我认为问题很简单,主要是由于你的流动相条件没有选择好,衍生化试剂和分析物的衍生化产物峰重合.
解决办法:改变流动相的有机相比例,调节pH,调节离子强度来将二者分开.这样,3个问题都可以解决.

请教一下：如果衍生化试剂和分析物的衍生化产物峰分开的话，那跑出的图谱上就会有两个峰，分别为衍生化试剂和分析物的衍生化产物的峰，是这样吗？

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2007/9/19 15:09:00 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 wuyinghao 发表:
看了你说的问题,我认为问题很简单,主要是由于你的流动相条件没有选择好,衍生化试剂和分析物的衍生化产物峰重合.
解决办法:改变流动相的有机相比例,调节pH,调节离子强度来将二者分开.这样,3个问题都可以解决.

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realtiger

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2007/9/19 16:33:00 8楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 sunny-qiu 发表:
原文由 wuyinghao 发表:
看了你说的问题,我认为问题很简单,主要是由于你的流动相条件没有选择好,衍生化试剂和分析物的衍生化产物峰重合.
解决办法:改变流动相的有机相比例,调节pH,调节离子强度来将二者分开.这样,3个问题都可以解决.

请教一下：如果衍生化试剂和分析物的衍生化产物峰分开的话，那跑出的图谱上就会有两个峰，分别为衍生化试剂和分析物的衍生化产物的峰，是这样吗？

应该是这样
除了是由于你的流动相条件没有选择好,衍生化试剂和分析物的衍生化产物峰重合这个原因外，还有可能是你的衍生条件有问题没有被完全衍生化

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