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主题：【求助】斐林试剂法测定还原糖碰到了些问题，望高手们给与指点

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colourful_life
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发表于：2006/08/18 14:07:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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这两天用斐林试剂法测定发酵液中的还原糖含量，首先做标准曲线，我用的标准曲线梯度（0~6号）分别是：0, 0.05%, 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5%。用590nm扫描反应的上清液，结果发现前四个浓度（0~3号）曲线的线性还比较好，但从0.3%开始，后三个的紫外扫描的OD值为负值，且0.3%的浓度的最低。我不知道是什么原因造成负值，这正常吗？
看反应的上清液，颜色从0~3号蓝色依次递减，4号（0.3%）几乎无色，5、6号颜色转为淡黄色，且依次递深，这又是什么原因呢？各位做的时候出现过这种情况吗？
看反应之后的砖红色沉淀又是0~6号依次增多的啊。
做了两次都是这样，不同的人操作的。我真是不明白了。
恳求这里的高手们能否与弟子讨论下这些问题呢？
谢谢了！
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zhyan
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2006/8/18 14:31:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
建议你用新配的显色剂再做一下,另如果你的光度计有波长扫描功能,建议你做一下,优化你的测定波长.
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2006/8/18 14:59:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zhyan 发表:
建议你用新配的显色剂再做一下,另如果你的光度计有波长扫描功能,建议你做一下,优化你的测定波长.


感谢您的回复和建议，这个方法是利用本身反应物的颜色来显色和测定的，而且波长选定是前人都有发表过的。
我在怀疑是不是因为铜离子被完全消耗所以至于后面三个浓度出现负值呢。而我的师弟则怀疑标准溶液不准，想重新配制。

这里我说明一下这个方法测定还原糖的原理。还原糖将斐林试剂的铜离子（蓝色）还原成亚铜离子，生成砖红色沉淀，根据蓝色退去的程度，可知道反应液中还原糖含量的多少。反应后离心取上清液测定溶液中剩余的铜离子含量从而间接知道还原糖含量。
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2006/8/18 18:05:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

问题解决了，谢谢各位。主要是因为我设的标准葡萄糖溶液浓度太高了，超过了现行范围。刚才又重新设定了检测范围，就好了。
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发哥
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2006/8/18 18:12:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 colourful_life 发表:

问题解决了，谢谢各位。主要是因为我设的标准葡萄糖溶液浓度太高了，超过了现行范围。刚才又重新设定了检测范围，就好了。


做这个方法需要认真、仔细，这样结果线性才能比较好。我以前做过。

下载更多资料: http://www.instrument.com.cn/download/search.asp?sel=admin_name&keywords=zjzxwwl2a
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xuzhangchen
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2006/11/7 20:09:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我想与在座的各位交流糖方面知识，期望大家多多指教！ 我的博客mchys.bokee.com 还原糖我用3.5－二硝基水杨酸来测定
多糖用蒽酮硫酸法，不知道大家可有好建议，另外我还想请教各位如何去除单糖多糖？谢谢！
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zhang13467
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2006/11/7 20:10:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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