8、要避免进入色谱柱的主要化合物是无机酸和碱。酸类包括盐酸(HCl)、硫酸(H2S04)、硝酸(HNO3)、磷酸(H3PO4) 和铬酸(CrO3)。碱类包括氢氧化钾(KOH)、氢氧化钠(NaOH) 和氢氧化铵(NH4OH)。大多数这些酸和碱不易挥发,会积聚在色谱柱前端。如果不清除它们,将会损坏固定相。这样会造成色谱柱的过分流失,活性组分形成拖尾,以及/或降低柱效(分离度)。其征兆和热损坏及氧损坏相似。盐酸和氢氧化铵是这一类化合物中危害最小的。这两种物质易
溶于样品中的水。如果水不停留或几乎不停留在色谱柱中,HCl 和NH4OH 在色谱柱中停留的时间就会很短。这就消除或降低了这些化合物所造成损坏的可能性。因此,如果样品中含有HCl 或NH4OH,使用不保留水的环境或色谱柱,即可相对减小这些化合物对色谱柱的危害。
9、有两种基本的污染物:不挥发性污染物和半挥发性污染物。不挥发性污染物或残留物不会洗脱出来,而会积聚在色谱柱内。这样色谱柱即成为涂渍了残留物的色谱柱,因而影响了溶质在溶入固定相和洗出固定相的正确分配。而且残留物还会与活性溶质相互作用,从而引起峰的吸附问题(例如拖尾峰或峰面积减少)。活性溶质是指含有羟基(-OH) 或氨基(-NH) 以及某些硫醇基(-SH) 和醛的物质。积聚在色谱柱内的半挥发性污染物或残留物,最终会被洗脱出去。但需要几个小时甚至几天才完全从色谱柱中洗脱。与不挥发性残留物一样,它们也会引起峰形和峰面积出现问题,此外,通常还会引起很多基线问题(不稳定、偏离、漂移、鬼峰等。
10、溶剂相极性不匹配。较早流出的峰或靠近溶剂前沿的峰更容易出现拖尾,解决办法:改变样品溶剂。
11、不分流进样或柱上进样的溶剂效应显著。解决办法:降低初始色谱柱温度。注释:使保留值增加,峰拖尾会减弱。
12、色谱柱安装差使较早流出的峰更容易拖尾。解决办法:重新安装色谱柱。
13、
液相:为减少拖尾,可以选择设计优良的封端色谱柱,且使用象三乙胺(TEA,较少需要)等添加剂,或使用“极性”键合相。
14、碱性化合物的峰拖尾可能是一个主要的色谱问题。峰拖尾降低了色谱效率以及结果的准确性和精确性。造成峰拖尾的主要原因是分析物和硅胶表面的相互作用(图1)。这类峰拖尾通常是由于硅胶表面存在的酸性硅醇基引起的。硅胶中的痕量金属也会增加硅醇的酸性和峰的不对称性。使用低酸性超纯(99.995%) 硅胶可以减少或消除这些硅醇基的相互作用。色谱的改善非常显著。
15、
液相拖尾峰出现原因及解决办法:
柱头有空隙。解决办法:使用填料或玻璃珠填充柱顶部
柱上样品超载。解决办法:使用更高负载量的固定相。增加色谱柱内径、减少样品量、
单峰- 存在干扰性组分。解决办法:净化样品;预分离
存在未扫的死体积。解决办法:减少接头的数量、确保进样器密封垫紧密、确保接头正确固定
碱性化合物- 硅醇相互作用。解决办法:换成聚合物固定相
碱性基质- 硅醇相互作用。解决办法:使用更强的流动相或添加竞争碱(例如,三甲胺)
硅胶基- 柱降解。解决办法:使用特种色谱柱;聚合物柱或空间位阻
硅胶基- 柱降解。解决办法:使用特种色谱柱;聚合物柱或空间位阻
以上内容来自色谱手册整理而来,供大家参考讨论。