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液相色谱（LC）
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主题：【求助】waters液相 流动相走梯度

浏览0 回复10 电梯直达
shi2004
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发表于：2008/01/26 10:53:43 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
各位大侠,偶是新手,在做液相准备用梯度洗脱.有一个简单的问题不太清楚: waters 液相带两个高压泵,分别伸向两个流动相瓶子的小管子也有一定长度,如果我在10min内走完一个梯度的话,通过色谱柱的流动相可能还是10min前的流动相,可能梯度流动相还没有真正进入色谱柱呢.  不知道说的对不对? 如何正确的走流动相梯度,还请各位高手多多指教!
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2008/1/29 10:04:58 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
当你准备开始运行梯度的时候一定是流动相已经运行到检测器了,换句话说就是减去了你说的那个10分钟
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gentlehorse
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2008/1/29 10:15:30 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
系统会有一个小的延迟体积，也就是从混合器到色谱柱的体积，需要一定时间，但楼主说的太夸张了
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sunchun2008
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2008/2/2 10:32:11 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
前两位老师的理解不对
他是认为梯度的比例是按溶剂瓶中管子口算起的
梯度比例是按两种溶剂混合的位置算起的，混合器是梯度比例改变的起点，梯度置后的多少，要看混合器体积/管路内腔体积的大小，行话叫死体积的大小，死体积大置后多；死体积小置后少，现代液相色谱死体积很小，一般只有几十微升，当1ml/min流速时，梯度从改变到柱头的时间也就几十秒钟。
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cctv2008
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2008/2/2 11:53:48 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
3楼说的很好
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阿du
duliuhui
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2008/2/2 12:06:53 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流动相梯度变化是从混合器开始的，当然流经柱子也要有一个过程，所以虽然显示梯度走完了，但柱子里的流动相仍然在按照梯度程序流动，所以不存在你想象的问题。你也会发现，梯度走完后需要过一段时间系统才会恢复初始状态。
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shi2004
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2008/2/14 17:21:16 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢各位, 学习了.
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jinbaoma
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2008/10/21 9:29:47 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
3楼和5楼说得对,你还可以根据你得到的图谱基线的走向趋势,大概可以看出你的流动相浓度变化在通过检测器检测后,实际变化和设计时间有一定的差距,就可以得出大概的相对检测滞后时间.
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nnsss
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2008/10/22 10:29:21 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 duliuhui 发表:
流动相梯度变化是从混合器开始的，当然流经柱子也要有一个过程，所以虽然显示梯度走完了，但柱子里的流动相仍然在按照梯度程序流动，所以不存在你想象的问题。你也会发现，梯度走完后需要过一段时间系统才会恢复初始状态。


变化点就是吸头,或者梯度混合器并不是问题的关键所在
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duming
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2008/10/24 20:47:43 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
基本不用考虑,因为系统体积最大就是几百ul反映在剃度上也就是十几秒的 延迟,另外从泵到溶剂瓶的管路体积是不参与计算的.
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juegen
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2012/8/11 9:52:38 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
梯度比例是按两种溶剂混合的位置算起的，混合器是梯度比例改变的起点，梯度置后的多少，要看混合器体积/管路内腔体积的大小，行话叫死体积的大小，死体积大置后多；死体积小置后少，现代液相色谱死体积很小，一般只有几十微升，当1ml/min流速时，梯度从改变到柱头的时间也就几十秒钟。
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