高效液相色谱法测定猪肉、熏肉及牛肉中的环丙氟派酸和英氟沙星的残留量Sg 3.5. Capiroflosacin and Enroflosacin-Routine Screening Method for the Determination by HPLC after Cation-Exchange Column Chromatography in Pig Muscle, Bacon and Bovine Muscle
引言
目的
按照86/469/EEC残留指令规定的要求,对牛肉和猪肉样品中是否存在环丙氟派酸和英氟沙星实施检测.
背景
环丙氟派酸和英氟沙星是广谱抗菌兽药.
1. 主题内容
本方法适用于猪肉、熏肉、牛肉中环丙氟派酸和英氟沙星的总含量的测定.该法已被MAFF, FSD, Norwich UK采用.
2. 应用范围
本法用于猪肉和牛肉样品的检测, 而对其它动物种类的肉中环丙氟派酸和英氟沙星的残留检测,本法可能也适用,但需进一步论证.本法最低检测限没有精确的限定,但通常可测得0.01mg/kg,该值因背景噪音的变化而发生变化.也有资料证实检测限可达0.001-0.002 mg/kg.
3. 参考资料
1).93/256/EEC委员会决议. 拟定的检测激素性或甲状腺素拮抗功能的残留物质的方法.[OJ.No 118,14.4.93.pp 64-74].
2).ISO78/2-1982标准,标准设计-第二部分:化学分析标准.
牛肉、猪肉和熏肉中环丙氟派酸和英氟沙星残留的测定.(1993),MAFF,食品安全理事会,食品科学实验室,Norwich UK.SOP10(1)
4. 定义
依照实验方法,肌肉或熏肉中环丙氟派酸或英氟沙星的含量是被检测的样品中环丙氟派酸或英氟沙星含量的平均值.结果表示为每千克测试样品中含环丙氟派酸或英氟沙星的微克数,单位ug/kg.
5. 方法提要
将均质的样品以1%的醋酸乙醇溶液中提取环丙氟派酸和英氟沙星.提取液用离子交换树脂柱净化,25%的氨水甲醇溶液洗脱.净化液用配备荧光检测器的反相高压色谱法测定.
6.0 实验材料
注意:以下的试剂和仪器都标明了来源,可以认为是符合实验要求的.如果所需的这些试剂和仪器是其它来源,也可等同使用.所有的试剂必须为分析纯或更好的级别.
6.1化学试剂
6.1.1.乙腈(Rathburn Chem Ltd)
6.1.2.氨水 密度0.88(BHD Ltd.)
6.1.3.无水乙醇(Hayman Ltd)
6.1.4.冰醋酸(FSA)
6.1.5.正磷酸(BDH Ltd)
6.1.6.甲醇(FSA)
6.1.7.三乙胺(BDH)
6.1.8.环丙氟派酸盐酸盐()
6.1.9.英氟沙星
6.1.10.用Elgastat UHP纯化处理的去离子水.
6.2.标准溶液
所有的标准溶液均于冰箱中储存.
6.2.1.储备液.
6.2.1.1.溶解5mg 环丙氟派酸于10mL水中.每月配制.
6.2.1.2.溶解5mg 英氟沙星于10mL水中.每月配制.
6.2.2.第一稀释液(10μg/mL).取200uL储备液(6.2.1.1,6.2.1.2),用甲醇稀释至10mL.临用前稀释.
6.2.3.第二稀释液(0.2μg/mL).取200μL第一稀释液(6.2.2),用流动相(6.3.4)稀释至10mL. 临用前稀释.
6.2.4.标准工作溶液(4ng/mL,20ng/mL).取0.2mL或1.0mL第二稀释液,用流动相(6.3.4)稀释至10mL.
6.2.5.组织标准工作液(4ng/mL或20ng/mL).用1mL标准工作液(6.2.4)溶解空白残渣(空白操作见9.13).
6.2.6.中间添加溶液.取200μL浓度为10μg/mL的溶液(6.2.2),用1%的醋酸乙醇溶液(6.3.1)稀释至10mL.
6.2.7. 出峰溶液.取0.2mL或1.0mL浓度为0.2μg/mL的溶液(6.2.3),用1%的醋酸乙醇溶液(6.3.1)稀释至10mL.
6.3溶液
6.3.1. 1%的醋酸乙醇溶液:取10mL醋酸(6.1.4)加至乙醇(6.1.3)中并定容至1L.
6.3.2. 25%的氨水甲醇溶液:取125mL氨水(6.1.2)加至甲醇(6.1.6)中并定容至500mL.
6.3.3. 0.01M磷酸盐/三乙胺缓冲液,pH3.0. 0.68mL磷酸(6.1.5)用水稀释至1L.再用三乙胺(6.1.7)调整酸度至pH3.0.
6.3.4. HPLC流动相.0.01mol/L磷酸盐/三乙胺缓冲液与乙腈按80:20(V/V)混合.并在减压条件下通过超声(7.3)脱气后过滤(7.14).