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红外光谱（IR）

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主题：【谱图】使用红外光谱分析蛋白质二级结构

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mifeng9310

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发表于：2009/03/19 21:45:34 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

哪位大仙做过红外分析蛋白质二级结构的，我十万火急需要您的指导！
怎么具体的操作才能得到二级结构的光谱，得到了该咋分析！
谢啦，谢啦！

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2009/3/19 22:22:36 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

其实就是将酰胺I谱带中包含的二级结构单元信息用曲线拟合的方法计算出来。
酰胺I谱带是一个很宽的吸收峰，覆盖1700-1600cm-1，其实是由几个子峰叠加在一起的，有α螺旋的，β折叠的，β转角的无规卷曲的，用曲线拟合的方法算出来每一结构单元的峰面积，峰高等，看每一结构单元在这个大的吸收峰中所占的面积百分比，即可得到每一二级结构单元的相对含量。当然你首先要知道到底有几个子峰，每一个峰的中心位置，拟合时要设定每一峰的半高宽以及峰型。

这种方法跟晶体衍射测出来的结构符合的还是相当好的。

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tutm

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2009/3/19 22:43:35 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 mifeng9310 发表:
哪位大仙做过红外分析蛋白质二级结构的，我十万火急需要您的指导！
怎么具体的操作才能得到二级结构的光谱，得到了该咋分析！
谢啦，谢啦！

你可以参考一下这篇文章，以及其中的参考文献。

蛋白质二级结构的Fourier变换红外光谱

附件：

蛋白质二级结构的Fourier变换红外光谱

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Spain

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2009/3/19 23:42:56 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

一般的红外软件都有解卷积的功能的。

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明心

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2009/3/20 23:19:24 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

用FTIR做蛋白质二级结构的关键是如何避除水溶液中水峰的干扰，从而获得真实有效的谱图，因为大多数蛋白质的自然存在状态都是以水溶液形式存在。
传统使用ATR附件比较多，但光学效率总比不上透过方式采样。最近发现Thermo有提供透过形式采样的蛋白质二级结构检测模块，据介绍效果不错。

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2009/3/21 9:57:40 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

Thermo提供的透过形式采样的蛋白质二级结构检测模块就不受溶剂水的影响了吗？是何道理呢，望请教？

可以用重水做溶剂来溶解蛋白质，重水在1650cm-1附近没有吸收峰，然后再利用差谱技术从蛋白质重水溶液光谱中减去重水的光谱。加上采用HATR测试，水的吸收峰要弱的多。

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mifeng9310

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2009/3/21 11:39:34 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 lh2000d 发表:
其实就是将酰胺I谱带中包含的二级结构单元信息用曲线拟合的方法计算出来。
酰胺I谱带是一个很宽的吸收峰，覆盖1700-1600cm-1，其实是由几个子峰叠加在一起的，有α螺旋的，β折叠的，β转角的无规卷曲的，用曲线拟合的方法算出来每一结构单元的峰面积，峰高等，看每一结构单元在这个大的吸收峰中所占的面积百分比，即可得到每一二级结构单元的相对含量。当然你首先要知道到底有几个子峰，每一个峰的中心位置，拟合时要设定每一峰的半高宽以及峰型。

这种方法跟晶体衍射测出来的结构符合的还是相当好的。

请教一下：
我现在得到了去卷积的谱图，也可以得到每一结构单元的峰面积，峰高，我不明白为什么文献上说还要进行曲线拟合，那个有什么意义？是不是就是为了减小误差？
另外你说的最后一句话我实在看不懂，可不可以解释的再详细一点啊？
Thank you !

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