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主题：【求助】有谁有过HPLC（制备型）分离纯化合成的oligo DNA的？

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rigmarole
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发表于：2009/08/27 10:31:13 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
悬赏金额：20积分 状态： 已解决
有谁用过HPLC（制备型）分离纯化合成的oligo DNA的？请教有用过的各位大哥大姐帮个忙，小的在这里谢过了.....
我主要是想了解一下一般常用的分离柱，流动相，洗脱液等
推荐答案：richies回复于2009/08/28
在Agilent的手册上面,有一个专门用来分离OLIGO的色谱柱,叫ZORBAX OLIGO,你可以试一试,我看到他有分离24和25mer的应用报告
补充答案：

It is me!回复于2009/08/29

一般用C18柱子做就可以的。流动相通常用纯水和乙腈。因为这样便于随后的冷冻干燥。

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2009/8/27 10:35:18 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
咦，第一次发帖就发漏字了 应该是：有谁用过HPLC（制备型）分离纯化合成的oligo DNA的？
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2009/8/27 17:56:24 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
大分子的DNA么?这个一般不用HPLC来做的吧

一般是用FPLC,用Sphedax填料来做
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2009/8/27 20:09:40 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 richies 发表:
大分子的DNA么?这个一般不用HPLC来做的吧

一般是用FPLC,用Sphedax填料来做

不是一般提取的那种DNA，是化学合成的，只有40多个mer（bp）的单链寡核苷酸。好像论坛都没啥人做过哦～～～都没人回复
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2009/8/28 10:57:17 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一个ATP的分子量为507,按核苷酸的平均分子量类似于ATP计算,40个核苷酸就是2W分子量,建议你可以试一试300A的C18柱做下反相梯度分离,梯度范围做的大一点

目前核酸的HPLC做的真的不多,不过估计跟多肽的HPLC分离制备比较接近,如果查不到相应的文献只能自己去摸条件了
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2009/8/28 11:27:01 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 richies 发表:
一个ATP的分子量为507,按核苷酸的平均分子量类似于ATP计算,40个核苷酸就是2W分子量,建议你可以试一试300A的C18柱做下反相梯度分离,梯度范围做的大一点

目前核酸的HPLC做的真的不多,不过估计跟多肽的HPLC分离制备比较接近,如果查不到相应的文献只能自己去摸条件了

谢谢啦！我不会加分~~~现在只有一点相关的资料，所以想向各位大哥大姐求救啦，真没想到回复的这么少，不过还好还有大哥你回复。
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2009/8/28 12:48:43 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在Agilent的手册上面,有一个专门用来分离OLIGO的色谱柱,叫ZORBAX OLIGO,你可以试一试,我看到他有分离24和25mer的应用报告
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hmzhou83
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2009/8/29 9:32:22 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般用C18柱子做就可以的。流动相通常用纯水和乙腈。因为这样便于随后的冷冻干燥。
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2009/8/31 16:21:01 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hmzhou83 发表:
一般用C18柱子做就可以的。流动相通常用纯水和乙腈。因为这样便于随后的冷冻干燥。

谢谢各位大哥的指点啦~~~希望能有更多的建议
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2009/8/31 16:49:13 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
做制备前,要多在HPLC上摸摸分离条件

不知道你现在手头有啥实验条件,HPLC仪器,300A的C18色谱柱是否有,如果有的话,可以尝试摸一下条件
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