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主题：【原创】紧急求助：用HPLC分析3、4、5-三羧酸苯胺相关问题（研究生色谱课考试题，不会，所以求助高手）

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bailing128
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发表于：2010/01/21 23:37:49 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
案例分析题：采用以下路线合成3、4、5-三羧酸苯胺。
（合成路线以附件形式上传）
购买了标准品，色谱条件如下：
色谱柱：ODS C18，4.6×250um，5um
检测波长：215nm
流动相：甲醇10+水90+0.5三氟乙酸

问题1：如上进行实验检测购买的标准品，发现主峰A：RT=4min,在RT=12min处有杂质B。按面积归归一法计算，A%=90%，B%=10%。但出厂报告单表明化合物浓度大于99%。请分析原因，并解决此问题，最终得到正确的HPLC结果。

问题2：问题解决完成以后，测试合成产品的质量，发现与对照品一致，纯度很好，于是出具合格单，产品卖出。但客户却反馈回来说明化合物只有90%的含量。请分析原因，并解决此问题，最终得到正确的HPLC结果。

问题3：采用问题1得到的方法进行含量分析，发现结果很好。但是采用亚硝酸或酸碱滴定，发现化合物含量只有90%左右，请分析此产品的纯度好坏，还可以用什么方法来判断此产品的纯度。

问题4：从问题1、2、3，说明HPLC的正确使用？

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bailing128
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2010/1/21 23:38:58 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
合成路线怎么不能上传啊？
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bailing128
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2010/1/22 9:32:52 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
怎么没人关注呢？？！！不会是我人品有问题吧？呵呵O(∩_∩)O~
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happy王子矜
wangzijin
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2010/1/22 9:42:34 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
饿，发现不对，要试验才知道
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Last edit by wangzijin
bailing128
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2010/1/22 9:51:26 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这就是一道考题，是没时间去试验的，需要用液相色谱的有关知识来解答。

不会啊，谢谢啦！
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happy王子矜
wangzijin
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2010/1/22 10:01:46 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
问题1：如上进行实验检测购买的标准品，发现主峰A：RT=4min,在RT=12min处有杂质B。按面积归归一法计算，A%=90%，B%=10%。但出厂报告单表明化合物浓度大于99%。请分析原因，并解决此问题，最终得到正确的HPLC结果。


样品和三氟乙酸发生反应，生成了另外一个杂质，改变方法，更换其他的流动相，就可以得出正确结果。（这个比较确定，TFA浓度太高了）





问题2：问题解决完成以后，测试合成产品的质量，发现与对照品一致，纯度很好，于是出具合格单，产品卖出。但客户却反馈回来说明化合物只有90%的含量。请分析原因，并解决此问题，最终得到正确的HPLC结果。


客户得出的结果和问题1的结果一样，客户也许也是使用了同样的方法。（这个不确定）






问题3：采用问题1得到的方法进行含量分析，发现结果很好。但是采用亚硝酸或酸碱滴定，发现化合物含量只有90%左右，请分析此产品的纯度好坏，还可以用什么方法来判断此产品的纯度。


苯胺与亚硝酸反应生成重氮盐，由此盐可制成一系列苯的衍生物和偶氮化合物。
亚硝酸滴定是不对的；苯胺本身就是双性的，酸碱滴定的时候NH2会影响结果。其他方法的话，就是GC了

问题4：从问题1、2、3，说明HPLC的正确使用？


自己总结吧，主要问题就是流动相不能和样品发生可逆反应。
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有水有渝
xky0230699
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2010/1/22 12:32:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、你的色谱方法是自己开发的吗？杂质与主成分的校正因子不在0.9-1.1之间的话，不能以归一法直接计算纯度，即使在0.9-1.1之间，也常用自身对照法。
2、你的标准品是哪里购买的，99%纯度可信度有多高，可以用对照品外标法检测样品的含量。
3、滴定法的没有太深的研究。
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儒雅凤
liwei7893
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2010/1/22 12:53:46 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

1.色谱条件与标准品的测试条件是否一致？从被测物的结构来看，流动相中含有三氟乙酸，有问题。
  定量测定，不采用面积归归一法计算。标准品中的杂质有可能在215nm检测波长下有很好的紫外吸收。
2.用户的检测方法是否和你一致？方法不一样，会有很大的测定误差。
3.化学法测定要排除干扰因素。




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sea1981
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2010/1/22 20:46:21 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
既然你的标准品做出来两个峰，做过核磁没有，能不能确定你的标准品有问题还是分析方法有问题，这个问题需要清楚，否则其他工作都是白费。如果标准品比较纯，你可以试着换换流动相，从你所要测试的化合物结构看先做个中性，把峰冲出来看看情况（中性体检应该对该化合物没有影响），之后再调PH，柱子，柱温等等条件。低波长的最好不要用三氟乙酸，想用酸性的话考虑一下磷酸吧！
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bailing128
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2010/1/22 21:58:33 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢5、6、7、8楼的高手啦！我再好好考虑。
这是老师发下来的一张试卷里的一道考题，老师的意思就是分析结果与报告单的结果出现差异，叫用液相色谱方面的知识进行解答

非常感谢了！
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gyro
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2010/1/22 22:13:15 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1.色谱法使用归一法定量分析的前提条件是所有成分全部出峰才可以使用，并且知道是什么有他的校正因子才可以。如果流动相与样品反应生成其他物质并且不知道那么不能使用。
2.要想比较要保证样品、仪器、色谱柱、进样方式、进样量、实验条件、分析计算方法一样才具有可比性。
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