实战宝典 原创大赛 仪器问答 仪友会 总帖：8043629今日发帖：96 我的社区 签到
快速导航 采购仪器 提醒
厂商论坛
版主:
入住本版
专家:
居民列表

主题：【原创】【极限体验活动】加入缓冲盐及改变其浓度对本人色谱实验的影响

浏览0 回复35 电梯直达
chqiu111111
头像
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
发表于：2010/03/12 12:27:33 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被zxhcnf设置为精华； 奖励积分记录： zxhcnf(20分)
鉴于此贴第一次的内容不是很清晰，现重新整理后发给大家。


加入缓冲盐及改变其浓度对本人色谱实验的影响



一．样品分子结构

本人做的是合成，利用高效液相来判断反应的终点。反应底物溶于碱性环境。由于目标分子的结构还未最终确定，所以抱歉暂时不能告诉大家。

二. 样品来源记录
对反应进行实时监测，每0.5h或1h取样一次。用注射器取反应液，过0.45μm微孔滤膜，即可。
三. 液相方法条件

本人在前期试验中用ph8的磷酸缓冲盐（0.2mol/L）。流动相为：流动相ph8的缓冲液：乙腈=95：5，1ml/min，柱温25℃，检测波长为220nm。进样量1μl

色谱图为：反应底物



反应2h后反应液




后因为要分离出目标产物，准备先上液质确定一下目标物分子量。但因为液质不能用磷酸缓冲盐，所以试了一下甲醇水，乙腈水，结果如下：

流动相：甲醇：水=10：90。样品为反应了1h的反应液。其他液相条件同上。





流动相：乙腈：水=5：95。样品为反应了1h的反应液。其他液相条件同上。



前期试验结果表明，反应了1h的反应液应该有三个峰，而从上面两个图可以看出， 只有一个峰，并且基线往下飘。相比前期试验条件，只有流动相的ph改变了，所以我们推断这种奇怪的现象的原因就是流动相的ph改变所致，于是我们马上又用流动相ph8的缓冲液做流动相，其他液相条件同上。

结果如下：（样品为反应了4h的反应液）



从上图可以看出，用流动相ph8的缓冲液时，各个峰已经分开，且基线没有出现下降现象。由此，我们断定，对合成反应体系进行实时监测，需要ph8的碱性环境。基于后续处理要用到液质不能用磷酸，在咨询老师之后，我们选择了用三乙胺来调节ph。

用三乙胺调ph8作流动相（三乙胺只用了一滴不到），其他液相条件同上。图谱如下：



从上图可以看出，结果仍然不行。老师建议用乙酸铵和氨水来调节ph。我们用20mmol/L乙酸铵和氨水调ph8，图谱如下：


上图与甲醇水、乙腈水、三乙胺作流动相的图谱比较，图谱从一个峰变成三个峰，各个峰已经明显分开，能够清晰辨别，与用磷酸缓冲盐做流动相的图谱相似，说明流动相改为碱性环境是对的，但是上图底物峰与目标峰还是分的不是很理想。比较20mmol/L乙酸胺和三乙胺跑的图，ph一样，我们觉得就是离子浓度不一样，20mmol/L乙酸胺离子浓度大于三乙胺的（三乙胺调节ph时，只有不到一滴。）遂决定在保证流动相的ph不变的情况下加大流动相的离子浓度，把20mmol/L乙酸胺上升到50mmol/L，其他液相条件同上。结果如下：


上图可以看出，三个物质已经完全分开了，图谱也与磷酸缓冲盐做的图谱时相似。达到了我们的要求。底物与目标物保留时间相差0.5分钟。但是这种保留时间差，上到制备液相是否可行，这种流动相（50mmol/L乙酸铵和氨水ph8）上到制备液相是否可行，还有待进一步试验。
为您推荐
近期热榜
热门活动
您可能想找: 气相色谱仪(GC) 询底价
选参数 看心得 找厂商 查方案
专属顾问快速对接
立即提交
可能感兴趣
hanlaoda199
hanlaoda199
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/3/12 17:36:27 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主，附件下载 不了啊？？怎么回事？
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
chqiu111111
chqiu111111
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/3/12 17:48:25 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
对于本人的试验，我化学基础及液相基础较差，上面的一些推论及观点也是自己想的，也不知道是否正确，欢迎大家讨论和指点。另我的反应体系中试加入了碳酸氢钠（溶解底物），对于它的除去，我个人现在也是毫无头绪。欢迎大家指点。

谈谈是使用月旭柱的心得：我在半年前购买了月旭C18，5um，4.6*250mm，最开始我不知道自己的液相条件是什么，所以也不知道自己到底该买哪种柱子比较好，经过销售员的推荐，刚好那个时候在打折，所以就购买了这跟柱子。这根柱子压力最开始的时候是80bar,一直是用这个比例：ph8缓冲液:乙腈=95：5，用了半年，现在上升到了98bar。个人认为还是不错的，而且这不是一根水柱，而是普通的C18柱。每次我用完缓冲盐后，我都是用大比例的水冲洗，再过渡到乙腈存柱，每次都是4h。由此，月旭柱质量还是可以的。基于本人的流动相，我打算再用一根月旭的水柱试一试。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
chqiu111111
chqiu111111
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/3/12 17:50:37 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hanlaoda199(hanlaoda199) 发表:
楼主，附件下载 不了啊？？怎么回事？


呵呵，不好意思，重新整理了一遍，不用下载了。欢迎多指点。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
lingshike
lingshike
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/3/12 19:23:34 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
继续加油，祝一切顺利！
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
雪妖
czj_1027
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/3/13 2:46:13 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用DAD检测过纯度吗？
看起来分得挺好的，不一定是一个物质
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
可爱宝贝
xiaoguodong
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/3/13 21:53:58 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主做的很认真
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
有水有渝
xky0230699
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/3/13 21:59:55 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 chqiu111111(chqiu111111) 发表:
对于本人的试验，我化学基础及液相基础较差，上面的一些推论及观点也是自己想的，也不知道是否正确，欢迎大家讨论和指点。另我的反应体系中试加入了碳酸氢钠（溶解底物），对于它的除去，我个人现在也是毫无头绪。欢迎大家指点。
quote]

如果底物能溶于有机相，那么直接用有机相萃取就行了，碳酸氢钠不溶于纯有机相，直接过滤就能除去。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
Last edit by xky0230699
chqiu111111
chqiu111111
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/3/13 23:28:43 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 雪妖(czj_1027) 发表:
用DAD检测过纯度吗？
看起来分得挺好的，不一定是一个物质

没有用这个做过哦，呵呵。我做的物质里面我确定是还有无机盐的。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
chqiu111111
chqiu111111
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/3/13 23:30:43 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xky0230699(xky0230699) 发表:
原文由 chqiu111111(chqiu111111) 发表:
对于本人的试验，我化学基础及液相基础较差，上面的一些推论及观点也是自己想的，也不知道是否正确，欢迎大家讨论和指点。另我的反应体系中试加入了碳酸氢钠（溶解底物），对于它的除去，我个人现在也是毫无头绪。欢迎大家指点。
quote]

如果底物能溶于有机相，那么直接用有机相萃取就行了，碳酸氢钠不溶于纯有机相，直接过滤就能除去。

我试过了底物不能溶于乙醚，石油醚，毕竟这些都有毒，产物的话我就不知道了！不过我可以试一下，可以指点一下一般是用什么有机相吗？谢谢了！
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
samanthalas
samanthalas
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2010/3/15 15:37:37 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主用的柱子是月旭公司Welchrom“优谱”系列的柱子。换成AQ水性柱当然更适合，不过一般只是在色谱柱寿命上的区别。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
手机版： 【原创】【极限体验活动】加入缓冲盐及改变其浓度对本人色谱实验的影响
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
头像
高级回复 发表评论
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁