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主题：【原创】【极限体验活动】加入缓冲盐及改变其浓度对本人色谱实验的影响

浏览0 回复35 电梯直达
chqiu111111
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发表于：2010/03/12 12:27:33 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被zxhcnf设置为精华； 奖励积分记录： zxhcnf(20分)
鉴于此贴第一次的内容不是很清晰，现重新整理后发给大家。


加入缓冲盐及改变其浓度对本人色谱实验的影响



一．样品分子结构

本人做的是合成，利用高效液相来判断反应的终点。反应底物溶于碱性环境。由于目标分子的结构还未最终确定，所以抱歉暂时不能告诉大家。

二. 样品来源记录
对反应进行实时监测，每0.5h或1h取样一次。用注射器取反应液，过0.45μm微孔滤膜，即可。
三. 液相方法条件

本人在前期试验中用ph8的磷酸缓冲盐（0.2mol/L）。流动相为：流动相ph8的缓冲液：乙腈=95：5，1ml/min，柱温25℃，检测波长为220nm。进样量1μl

色谱图为：反应底物



反应2h后反应液




后因为要分离出目标产物，准备先上液质确定一下目标物分子量。但因为液质不能用磷酸缓冲盐，所以试了一下甲醇水，乙腈水，结果如下：

流动相：甲醇：水=10：90。样品为反应了1h的反应液。其他液相条件同上。





流动相：乙腈：水=5：95。样品为反应了1h的反应液。其他液相条件同上。



前期试验结果表明，反应了1h的反应液应该有三个峰，而从上面两个图可以看出， 只有一个峰，并且基线往下飘。相比前期试验条件，只有流动相的ph改变了，所以我们推断这种奇怪的现象的原因就是流动相的ph改变所致，于是我们马上又用流动相ph8的缓冲液做流动相，其他液相条件同上。

结果如下：（样品为反应了4h的反应液）



从上图可以看出，用流动相ph8的缓冲液时，各个峰已经分开，且基线没有出现下降现象。由此，我们断定，对合成反应体系进行实时监测，需要ph8的碱性环境。基于后续处理要用到液质不能用磷酸，在咨询老师之后，我们选择了用三乙胺来调节ph。

用三乙胺调ph8作流动相（三乙胺只用了一滴不到），其他液相条件同上。图谱如下：



从上图可以看出，结果仍然不行。老师建议用乙酸铵和氨水来调节ph。我们用20mmol/L乙酸铵和氨水调ph8，图谱如下：


上图与甲醇水、乙腈水、三乙胺作流动相的图谱比较，图谱从一个峰变成三个峰，各个峰已经明显分开，能够清晰辨别，与用磷酸缓冲盐做流动相的图谱相似，说明流动相改为碱性环境是对的，但是上图底物峰与目标峰还是分的不是很理想。比较20mmol/L乙酸胺和三乙胺跑的图，ph一样，我们觉得就是离子浓度不一样，20mmol/L乙酸胺离子浓度大于三乙胺的（三乙胺调节ph时，只有不到一滴。）遂决定在保证流动相的ph不变的情况下加大流动相的离子浓度，把20mmol/L乙酸胺上升到50mmol/L，其他液相条件同上。结果如下：


上图可以看出，三个物质已经完全分开了，图谱也与磷酸缓冲盐做的图谱时相似。达到了我们的要求。底物与目标物保留时间相差0.5分钟。但是这种保留时间差，上到制备液相是否可行，这种流动相（50mmol/L乙酸铵和氨水ph8）上到制备液相是否可行，还有待进一步试验。
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hanlaoda199
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2010/3/12 17:36:27 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主，附件下载 不了啊？？怎么回事？
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chqiu111111
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2010/3/12 17:48:25 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
对于本人的试验，我化学基础及液相基础较差，上面的一些推论及观点也是自己想的，也不知道是否正确，欢迎大家讨论和指点。另我的反应体系中试加入了碳酸氢钠（溶解底物），对于它的除去，我个人现在也是毫无头绪。欢迎大家指点。

谈谈是使用月旭柱的心得：我在半年前购买了月旭C18，5um，4.6*250mm，最开始我不知道自己的液相条件是什么，所以也不知道自己到底该买哪种柱子比较好，经过销售员的推荐，刚好那个时候在打折，所以就购买了这跟柱子。这根柱子压力最开始的时候是80bar,一直是用这个比例：ph8缓冲液:乙腈=95：5，用了半年，现在上升到了98bar。个人认为还是不错的，而且这不是一根水柱，而是普通的C18柱。每次我用完缓冲盐后，我都是用大比例的水冲洗，再过渡到乙腈存柱，每次都是4h。由此，月旭柱质量还是可以的。基于本人的流动相，我打算再用一根月旭的水柱试一试。
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chqiu111111
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2010/3/12 17:50:37 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hanlaoda199(hanlaoda199) 发表:
楼主，附件下载 不了啊？？怎么回事？


呵呵，不好意思，重新整理了一遍，不用下载了。欢迎多指点。
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lingshike
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2010/3/12 19:23:34 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
继续加油，祝一切顺利！
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雪妖
czj_1027
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2010/3/13 2:46:13 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用DAD检测过纯度吗？
看起来分得挺好的，不一定是一个物质
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可爱宝贝
xiaoguodong
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2010/3/13 21:53:58 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主做的很认真
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有水有渝
xky0230699
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2010/3/13 21:59:55 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 chqiu111111(chqiu111111) 发表:
对于本人的试验，我化学基础及液相基础较差，上面的一些推论及观点也是自己想的，也不知道是否正确，欢迎大家讨论和指点。另我的反应体系中试加入了碳酸氢钠（溶解底物），对于它的除去，我个人现在也是毫无头绪。欢迎大家指点。
quote]

如果底物能溶于有机相，那么直接用有机相萃取就行了，碳酸氢钠不溶于纯有机相，直接过滤就能除去。
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Last edit by xky0230699
chqiu111111
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2010/3/13 23:28:43 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 雪妖(czj_1027) 发表:
用DAD检测过纯度吗？
看起来分得挺好的，不一定是一个物质

没有用这个做过哦，呵呵。我做的物质里面我确定是还有无机盐的。
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chqiu111111
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2010/3/13 23:30:43 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xky0230699(xky0230699) 发表:
原文由 chqiu111111(chqiu111111) 发表:
对于本人的试验，我化学基础及液相基础较差，上面的一些推论及观点也是自己想的，也不知道是否正确，欢迎大家讨论和指点。另我的反应体系中试加入了碳酸氢钠（溶解底物），对于它的除去，我个人现在也是毫无头绪。欢迎大家指点。
quote]

如果底物能溶于有机相，那么直接用有机相萃取就行了，碳酸氢钠不溶于纯有机相，直接过滤就能除去。

我试过了底物不能溶于乙醚，石油醚，毕竟这些都有毒，产物的话我就不知道了！不过我可以试一下，可以指点一下一般是用什么有机相吗？谢谢了！
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samanthalas
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2010/3/15 15:37:37 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主用的柱子是月旭公司Welchrom“优谱”系列的柱子。换成AQ水性柱当然更适合，不过一般只是在色谱柱寿命上的区别。
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