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主题：【求助】请教：HPLC，流动相问题！

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kuuikaifeng
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发表于：2010/04/09 23:38:47 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我先用乙腈/水提取，然后用agilent C18填料做成的小柱净化，取上清液离心，再取离心后的上清液用10mM醋酸铵稀释，这样用微孔滤膜过滤后能直接上液相吗？（流动相：甲醇/水=45/55），不需要再向样品中加入甲醇吗？我以前做的时候流动相是甲醇/水，样品一般用甲醇溶解啊。谢谢啊
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2010/4/9 23:49:31 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
why not!?
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kuuikaifeng
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2010/4/10 0:07:29 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 bigpalewolf(bigpalewolf) 发表:
why not!?


建议楼上好好回答一下，非常感谢！
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lvzhijiang
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2010/4/10 6:56:46 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
完全可以啊。醋酸铵水溶液在甲醇/水体系中完全溶解的啊。

原文由 kuuikaifeng(kuuikaifeng) 发表:
我先用乙腈/水提取，然后用agilent C18填料做成的小柱净化，取上清液离心，再取离心后的上清液用10mM醋酸铵稀释，这样用微孔滤膜过滤后能直接上液相吗？（流动相：甲醇/水=45/55），不需要再向样品中加入甲醇吗？我以前做的时候流动相是甲醇/水，样品一般用甲醇溶解啊。谢谢啊
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冷冷的冰雨
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2010/4/10 8:04:01 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 kuuikaifeng(kuuikaifeng) 发表:
我先用乙腈/水提取，然后用agilent C18填料做成的小柱净化，取上清液离心，再取离心后的上清液用10mM醋酸铵稀释，这样用微孔滤膜过滤后能直接上液相吗？（流动相：甲醇/水=45/55），不需要再向样品中加入甲醇吗？我以前做的时候流动相是甲醇/水，样品一般用甲醇溶解啊。谢谢啊

溶解样品用溶剂有两点必须具备1、能够溶解样品2、和流动相互溶
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海边
yxm0411
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2010/4/10 14:03:09 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 kuuikaifeng(kuuikaifeng) 发表:
我先用乙腈/水提取，然后用agilent C18填料做成的小柱净化，取上清液离心，再取离心后的上清液用10mM醋酸铵稀释，这样用微孔滤膜过滤后能直接上液相吗？（流动相：甲醇/水=45/55），不需要再向样品中加入甲醇吗？我以前做的时候流动相是甲醇/水，样品一般用甲醇溶解啊。谢谢啊

建议加入适量甲醇，是的样品中甲醇比例和流动相一致，此时溶剂效应会最小，峰形会最好。当然了，如果你现在的峰形应经很好了，也可以不加甲醇。
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miss_fairy
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2010/4/10 20:24:48 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般都用流动相溶，以减小溶剂效应。
乙腈和甲醇极性不同，而且加入醋酸盐调节，不知会不会会产生一些偏差。
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