主题：【第三届原创大赛】某中药挥发油类化合物的分离体会

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某中药挥发油类化合物的分离体会

    我做的是某中药挥发油的分离。先简单介绍一下挥发油本身的一些性质吧，让大家对这方面有个大概的了解。挥发油是一类具有芳香气味的油状液体，在常温下下就可以挥发，可以随水蒸气蒸馏，因为其具有广泛的生物活性，所有一度成为研究的热点。这次是和大家分享一下我分离挥发油的心得。

    第一：先做小试，有人不愿意做这个小试，但是没有办法，老板逼着做，也就是做给老板看看，但作为一个在提取分离方面的缺乏经验的人，我还是很愿意做一下小试，当是给自己长长经验。因为是小试，这时候犯些错误才好，这样可以在上大柱的时候避免这些错误。这也是我坚持做小试的原因。另外一个原因也趋使我很愿意去做小试，那就是通过小试的结果，我可以大体上验证自己所摸索的上大柱的条件是否有理想的分离效果，虽然小柱的效果不能完全转化为大柱的效果，但我觉得还是有一定的参考价值。

    我做过两次小试，在这里，我想表达一下我的想法，我认为没有千篇一律的梯度，各个样品的性质都不一样，每个样品应该有其自身的特点，对于别人的样品有好的洗脱效果的不一定也就会对你的样品有好的效果。所以对于梯度的选择大家还是应该根据自己的样品去探索，不要总是那几个梯度。我觉得不一定是最佳的选择。

下面是我在小试过程中的一些薄层色谱图。从左到右，展开剂分别为：
石油醚：乙酸乙酯=200:1  200:3      200:5          200:7        200:12     




    接着就是具体操作：蒸干的粘稠的挥发油 样品1.3g，拌样硅胶（100-140目）4g，柱床硅胶（200-300目）16g装柱，再 加上保护硅胶（特别有用，上个大柱难免会有跑干的时候，在很着急的情况下，一般的反应就是拿起洗脱机直接往柱子里加了，如果没有保护硅胶的话那就只有一个结果，样品被砸个洞，我就这样过，悔死了没加保护硅胶）。分离挥发油的时候大家不要太担心硅胶的死吸附问题，因为其本身极性很小，且又具有挥发性，所以相对很多乙酸乙酯，氯仿层的化合物， 死吸附还是在可以接受的范围之内的。

    拌样很重要，拌样的好坏很大程度上会影响分离的效果，溶液可以稀一点儿，不要怕麻烦，每次加一点，然后拌匀，刚开始的时候可以速度快一点，加入的量多一点也是没有关系的，到后面，由于硅胶倾向于饱和，所以吸附的速度也会变慢，少少的加入，慢慢的拌匀，当硅胶达到制剂软材的程度时要立即停止拌样，将其在通风橱挥干，再继续拌样，总之拌样是一个很磨人的过程，大家一定要有耐心，想着拌样拌好了，也就成功了一半了，这样来鼓励自己吧。

    接着就是上柱洗脱了，因为挥发油类成分用浓硫酸-香草醛显示基本都是紫红色，而且极性非常的相似，所以柱子上洗脱下来的成分光凭色带不能辨别究竟洗到哪个成分了，究竟要洗几个保留体积，什么时候该换梯度，这是要拿捏好的。因为挥发油本身的显色的特殊性，所以我在洗脱的时候都是用TLC点板跟踪的，每隔几个馏分点个小板看看，这样换梯度的时候也有个理论根据。一般刚开始的几个保留体积不需要点很多，等到第4，5 个保留体积的时候应点的频率高一点，以作为我们及时换梯度的依据。这里附上一张我做挥发油小试的总梯度效果图。
石油醚：乙酸乙酯=10:1



小结与讨论
1. 挥发油类成分的特点：极性非常小，下面这张图片，是我用石油醚：乙酸乙酯=9:1展开的，可见其极性之小，各斑点的Rf都很大。所以在分离的时候，我们可以优先考虑硅胶柱层析，制备薄层这样的方法，后期如果遇到极性特别相似的分不开，可以试试用正向HPLC 来制备样品。



2. 在减压回收溶剂的时候旋转蒸发仪的温度不可过高，我一般设在30度左右，最高不超过35度，再高的话挥发油就有可能被抽走，从而损失样品。也有人选择用水浴锅，我是不赞成用那种方法的，因为在常压状态下工作的水浴锅，一般设定的温度都很高，总得在80-90度，而这个温度显然是不适合我们的挥发油的。

3. 因为挥发油本身的挥发性，在减压回收溶剂的时候不要像其他很多不易挥发的样品那样蒸的很干，如果挥发油也蒸的很干的话，那必然会损失大量的样品。

4.挥发油的分离也不全是不利因素，也是有一些有利的方面，比如说成点性就很好，很清晰，这一点我就很喜欢，可以很清晰的看到自己的目标物质。

5.最后补充一点，虽然不是跟挥发油直接相关的，但是我觉得大家不管什么样品的时候上柱子都会用得到。那就是我们在配置洗脱剂的时候要考虑温度的变化对混合溶剂带来的密度的变化，我测试过，同一比例的混合溶剂早上和中午的密度在密度计上能有一两格之大的区别，本来我们相连两个梯度之间的密度相差也不是很大，在密度计上也就一两格的差距，这样环境温度对密度的影响大家也就一目了然了。

    我现在的想法就是这么多了，以后有什么新的这方面的分离体会会继续和大家交流，祝大家工作顺心，学习愉快！